活性化破骨細胞が産生する骨代謝調節因子の探索

寻找活化破骨细胞产生的骨代谢调节剂

基本信息

批准号：
18659541
负责人：
池田通
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

骨組織の腫瘍において反応性骨増生がよく認められるが、本研究はその分子機構について明らかにすることを目的とする。今年度も骨軟部腫瘍の症例を通して幅広く反応性骨増生の観察を続けた結果、巨細胞腫瘍に頻繁に認められる反応性骨増生の場合と同様に破骨細胞の関与が強く示唆された。また、破骨細胞と反応性骨増生部位とは直接接していないことが普通であり、何らかの液性因子が反応性骨増生に係わっていることが考えられた。昨年度までに、吸収性セラミック上の破骨細胞の培養上清には破骨細胞形成を抑制する作用があること、吸収性、非吸収性骨代替材料上で形成された破骨細胞の培養上清には、ともにC2C12細胞の骨芽細胞への分化を促進する作用があることを明らかにしている。今年度は細胞の遺伝子発現解析をするため、本実験用に加圧成形法を用いて直径25mmのハイドロキシアパタイト(非吸収性セラミック)ディスク及びβ-TCP(吸収性セラミック)ディスクを作成した。これらのディスクの気孔率、表面形状及び成分を解析し、いずれも問題がないことを確認した上で、まずこのディスク上で従来からの打ち抜き法で作成したディスク同様、支障なく破骨細胞が形成され得ることを酒石酸抵抗性酸性ボスファターゼ染色及びDAPI染色で確認した。次に、RANKLタンパク存在下でそれぞれのディスク上にマウス大腿骨及び脛骨由来マクロファージを破骨細胞に分化させ、これらの破骨細胞からtotalRNAを抽出し、吸収性セラミック上の破骨細胞と、非吸収性セラミック上の破骨細胞が発現する遺伝子の差を、マイクロアレイを用いて網羅的に解析した。アレイ解析は、それぞれ2回行った実験試料を用いて行った。現在、吸収性セラミック上の破骨細胞と非吸収性セラミック上の破骨細胞の発現遺伝子を比較し、両者間で有意な差があると判断される遺伝子を検索している最中である。この結果に基づき、次の新たな研究プロジェクトを開始する予定である。

骨组织肿瘤中经常观察到反应性骨增殖，本研究的目的是阐明其分子机制。今年，我们继续在广泛的骨和软组织肿瘤病例中观察到反应性骨质增生，结果强烈表明破骨细胞参与其中，就像在巨细胞中经常观察到的反应性骨质增生一样肿瘤。此外，破骨细胞和反应性骨生长部位通常不直接接触，这表明一些体液因子参与反应性骨生长。截至去年，我们发现可吸收陶瓷上的破骨细胞培养上清液具有抑制破骨细胞形成的作用，而可吸收性和不可吸收性骨替代材料上形成的破骨细胞培养上清液已被揭示，这两者都具有抑制破骨细胞形成的作用。血清具有促进C2C12细胞向成骨细胞分化的作用。今年，为了分析细胞中的基因表达，我们采用压力成型方法制作了直径为25毫米的羟基磷灰石（不可吸收陶瓷）圆盘和β-TCP（可吸收陶瓷）圆盘。在分析了这些椎间盘的孔隙率、表面形状和成分并确认没有问题后，我们首先确定破骨细胞可以在这些椎间盘上毫无问题地形成，就像使用传统冲压方法制成的椎间盘一样，这是通过酒石酸盐证实的。 -抗酸性磷酸酶染色和DAPI染色。接下来，在RANKL蛋白存在下，将来自小鼠股骨和胫骨的巨噬细胞分化为每个椎间盘上的破骨细胞，从这些破骨细胞中提取总RNA，并将可吸收陶瓷上的破骨细胞和非破骨细胞分化为破骨细胞，我们综合分析了差异。使用微阵列在可吸收陶瓷上破骨细胞表达的基因中。使用实验样品进行阵列分析，每个实验样品进行两次。我们目前正在比较可吸收陶瓷上的破骨细胞和不可吸收陶瓷上的破骨细胞中表达的基因，并寻找被判断为两者之间存在显着差异的基因。基于这些结果，我们计划启动一个新的研究项目。