イチゴ黒斑病菌の病原性を決定するCD染色体の機能マッピング

决定草莓黑斑菌致病性的CD染色体功能图谱

• 批准号: 18658018
• 负责人: 柘植 尚志
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18658018/
• 关键词: 植物病原糸状菌; Alternaria alternata; 宿主特異的毒素; イチゴ黒斑病菌; CD染色体; 遺伝子発現解析; プロトプラスト融合

先に、イチゴ黒斑病菌のAF毒素生合成遺伝子クラスターが培地上での成育には必要でない1.05Mbのconditionally dispensable染色体(CD染色体)にコードされていることを見出した。そこで、本染色体の塩基配列を決定し、449kbと554kbの2つのコンティグ(コンティグ1および2)を同定した。さらに、コンティグ1と2にコードされる151個および170個の遺伝子を推定し、コンティグ2から毒素生合成遺伝子クラスターを同定した。本研究では、両コンティグにコードされるすべての遺伝子について、栄養条件が異なる5種の培地で培養した場合の転写レベルをリアルタイムRT-PCR法によって定量解析した。その結果、ほとんどの遺伝子の転写レベルがアクチン遺伝子(内部標準)に比べ著しく低いことが明らかとなった。また、ほとんどの遺伝子の発現が、植物中と類似した条件であるN源を含まない最少培地で誘導されること、他の培地での遺伝子発現パターンが両コンティグ間で異なることを見出した。CD染色体の毒素生合成遺伝子領域以外について、40kb程度を順次欠失させた部分欠失変異株シリーズを作成し、新奇な病原性関連遺伝子の同定を試みた。研究を進める過程で、CD染色体にコードされる遺伝子の一部が他の染色体にも存在することが明らかとなった。そこで、上記変異株を作出するための材料として、CD染色体遺伝子をほとんど持たない非病原性株にCD染色体を導入した菌株の作出を試みた。非病原性株にハイグロマイシンB抵抗性遺伝子、イチゴ黒斑病菌にジェネティシン抵抗性遺伝子をそれぞれ導入した。なお、イチゴ黒斑病菌では、相同的組換えを用いてジェネティシン抵抗性遺伝子をCD染色体に導入した。両菌株のプロトプラスト融合によって、両薬剤に抵抗性の融合株を選抜し、融合株の毒素生産性、病原性、核型などを解析した。

早些时候，我发现草莓黑点的AF毒素生物合成基因簇编码在1.05MB的条件性可染色体染色体（CD染色体）中，这对于培养基上的生长不是必需的。因此，确定了主铬材料的基础序列，并鉴定了两个链接（contign 1和2），449kb和554kb。此外，估计了在重叠仪1和2中编码的151和170基因，并从重叠群2中鉴定出毒素活体合成基因簇。在这项研究中，通过实时RT-PCR方法量化了五种具有不同营养条​​件的培养基中两个连续性中所有基因的迁移水平。结果，很明显，大多数基因转移水平明显低于肌动蛋白基因（内标）。他还发现，大多数基因表达在不包括与植物相似的N来源的最小培养基中进行引导，并且在两个垫子中，其他培养基中的基因表达模式都不同。我们创建了一个部分指数 /脆弱的股票系列，除了CD染色体的毒素原始合成基因区域以外，该系列逐渐损失了约40kb，并试图鉴定一个奇怪的致病基因。在进行研究的过程中，揭示了CD染色体中编码的一些基因存在于其他染色体中。因此，作为创建上述可变份额的材料，我们试图在非染色体菌株中使用CD染色体基因的非致病菌株中使用CD染色体创建细菌。在非致病性菌株中引入了遗传毒素耐药基因，并在高半血霉能B抗性和草莓黑点中引入了遗传抗病基因。在草莓黑点的情况下，使用同源重组将通用基因的通用基因引入CD染色体。通过分析了融合菌株的毒素生产力，致病性和核，选择了两种药物的抗性融合。

项目成果

DNA transposon fossils present on the conditionally dispensable chromosome controlling AF-toxin biosynthesis and pathogenicity of Alternaria alternata

存在于有条件可有可无的染色体上的 DNA 转座子化石控制着链格孢 (Alternaria alternata) 的 AF 毒素生物合成和致病性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of General Plant Pathology 72・4
• 作者: 水口裕也;他;細川宗孝・鈴江久尚・矢澤進;B. Kim;H. Shimura;A. Nagamatsu;T. Uehara;J. S. Hong;K. Goto;A. Nagamatsu;増田 税;増田 税;太田垣駿吾;永松 敦;Rieko Hatta
• 通讯作者: Rieko Hatta