白血病モデルマウスに対する分子標的療法の遺伝子発現光画像法によるモニタリング

利用基因表达光学成像监测白血病模型小鼠的分子靶向治疗

基本信息

批准号：
16659314
负责人：
井上優介
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

平成16年度に樹立したルシフェララーゼ安定発現白血病モデル細胞を用いて白血病モデルマウスを作成した。野生型BALB/cマウスに皮下接種すると細胞は生着しなかったが、BALB/cヌードマウスに皮下接種すると局所で増殖した。BALB/cヌードマウスに様々な数の細胞を静注して生体発光画像法で追跡したところ、肝、脾、骨髄に対応する部位に増殖が観察され、白血病モデル動物として使用可能なことが示唆された。この実験の結果に基づいて、至適静注細胞数を決定した。また、基質であるルシフェリンを投与してからの時間と発光量の関係、撮像時のマウスの姿勢と収集される信号の関係、バックグラウンド信号の量と分布を検討し、撮像方法・データ処理方法を決定した。予備実験で決定された方法で、白血病モデルマウスの病変進行を生体発光画像法を用いて同一マウスで追跡したところ、いずれのマウスでも発光信号量は経時的に増加した。信号増加の速さ、静注後の生存期間には大きな個体差があったが、死亡時の信号量はほぼ同等で、信号量が疾患の重篤度を反映することが示唆された。また、細胞静注後の様々な時点で、生体発光画像法で撮像した後に速やかに臓器を摘出して撮像し、病変進行を臓器毎に評価した。肝、脾、骨髄における増殖が証明され、各臓器の信号は経時的に増強し、生きたマウスを撮像して得られた信号量とよく相関した。肝、脾の湿重量も経時的に増大し、摘出後の信号強度と相関した。また、臓器毎の評価にあたり、摘出臓器の発光には空気との接触が必要であり、骨髄中細胞を評価するには骨破壊が必要であることを示した。進行白血病モデルマウスに対するイマチニブ治療では有意の信号低下はみられず、効果を得るにはより軽症の時点で治療を開始する必要があると考えられた。

采用2004年建立的稳定表达荧光素酶的白血病模型细胞制作白血病模型小鼠。当皮下接种到野生型BALB/c小鼠中时，细胞没有移植，但当皮下接种到BALB/c裸鼠中时，它们进行了局部增殖。当将不同数量的细胞静脉注射到BALB/c裸鼠中并使用生物发光成像进行追踪时，在对应于肝脏、脾脏和骨髓的区域中观察到增殖，这表明它们可以用作白血病模型动物。。根据该实验的结果，确定了静脉注射的最佳细胞数。此外，我们还研究了底物荧光素给药后的时间与发光量之间的关系、成像时小鼠的姿势与收集到的信号之间的关系、背景信号的数量和分布，并对成像方法进行了研究和数据处理方法已确定。当他们使用初步实验中确定的方法使用生物发光成像追踪同一只小鼠的白血病模型小鼠的病变进展时，所有小鼠的发光信号量随着时间的推移而增加。虽然静脉注射后信号增加的速度和存活时间存在较大的个体差异，但死亡时的信号量几乎相同，提示信号量反映了疾病的严重程度。此外，在静脉注射细胞后的不同时间点，立即取出器官并在使用生物发光成像成像后进行成像，并评估每个器官的病变进展。在肝脏、脾脏和骨髓中证实了增殖，并且每个器官中的信号随着时间的推移而增加，并且与活体小鼠成像获得的信号量良好相关。肝脏和脾脏的湿重也随着时间的推移而增加，并且与去除后的信号强度相关。此外，在评估每个器官时，我们发现与空气的接触对于被切除的器官发光是必要的，并且骨质破坏对于评估骨髓中的细胞是必要的。在伊马替尼治疗晚期白血病模型小鼠中没有观察到明显的信号减弱，这表明治疗必须在疾病较轻的阶段开始才能有效。