白血病モデルマウスに対する分子標的療法の遺伝子発現光画像法によるモニタリング

利用基因表达光学成像监测白血病模型小鼠的分子靶向治疗

基本信息

批准号：
16659314
负责人：
井上優介
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

平成16年度に樹立したルシフェララーゼ安定発現白血病モデル細胞を用いて白血病モデルマウスを作成した。野生型BALB/cマウスに皮下接種すると細胞は生着しなかったが、BALB/cヌードマウスに皮下接種すると局所で増殖した。BALB/cヌードマウスに様々な数の細胞を静注して生体発光画像法で追跡したところ、肝、脾、骨髄に対応する部位に増殖が観察され、白血病モデル動物として使用可能なことが示唆された。この実験の結果に基づいて、至適静注細胞数を決定した。また、基質であるルシフェリンを投与してからの時間と発光量の関係、撮像時のマウスの姿勢と収集される信号の関係、バックグラウンド信号の量と分布を検討し、撮像方法・データ処理方法を決定した。予備実験で決定された方法で、白血病モデルマウスの病変進行を生体発光画像法を用いて同一マウスで追跡したところ、いずれのマウスでも発光信号量は経時的に増加した。信号増加の速さ、静注後の生存期間には大きな個体差があったが、死亡時の信号量はほぼ同等で、信号量が疾患の重篤度を反映することが示唆された。また、細胞静注後の様々な時点で、生体発光画像法で撮像した後に速やかに臓器を摘出して撮像し、病変進行を臓器毎に評価した。肝、脾、骨髄における増殖が証明され、各臓器の信号は経時的に増強し、生きたマウスを撮像して得られた信号量とよく相関した。肝、脾の湿重量も経時的に増大し、摘出後の信号強度と相関した。また、臓器毎の評価にあたり、摘出臓器の発光には空気との接触が必要であり、骨髄中細胞を評価するには骨破壊が必要であることを示した。進行白血病モデルマウスに対するイマチニブ治療では有意の信号低下はみられず、効果を得るにはより軽症の時点で治療を開始する必要があると考えられた。

使用白血病模型细胞制备白血病模型小鼠，这些细胞稳定以表达在2004年建立的荧光素酶。当野生型BALB/C小鼠地下接种野生型BALB/C小鼠时，细胞不会植入，但是当地下将BALB/C裸鼠接种时，它们会局部接种时，它们会加长。当将各种数量的细胞静脉注射到BALB/C裸鼠中，然后进行生物发光成像时，在与肝脏，脾脏和骨髓相对应的部位观察到增殖，这表明它们可以用作白血病模型动物。根据该实验的结果，确定了最佳的静脉内细胞数量。此外，在成像时和收集的信号时小鼠姿势之间的发光时间和发光之间的时间之间的关系以及检查了背景信号的量和分布之间的关系，并确定了成像方法和数据处理方法的数量和分布。当使用初步实验中确定的方法进行生物发光成像之后，在白血病模型中的病变进展后，两只小鼠的发光信号的量随时间升高。尽管静脉注射后信号增加和存活的速度存在很大的个体差异，但死亡时的信号量几乎相同，这表明信号量反映了疾病的严重程度。此外，在静脉注射后的各个时间点，通过生物发光成像在细胞时迅速去除和成像器官，并评估每个器官的病变进展。证明了肝脏，脾脏和骨髓中的增殖，每个器官的信号随着时间的推移而增加，并且与成像活小鼠获得的信号量很好地相关。随着时间的推移，肝脏和脾脏的湿重也会增加，并在去除后与信号强度相关。此外，在评估每个器官时，表明切除器官需要与空气接触以发出光，并且评估骨髓细胞需要骨骼破坏。小鼠高级白血病模型的伊马替尼治疗并未显示出显着的信号降低，因此人们认为需要在较温和的点开始治疗以实现有效性。