ホスホリパーゼDによるタンパク質翻訳後修飾ホスファチジル化の解析

磷脂酶 D 进行的蛋白质翻译后修饰磷脂酰化分析

基本信息

批准号：
16659026
负责人：
金保安則
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Tsukuba (2005)Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ホスホリパーゼD(PLD)は、生理的条件下では細胞膜構成リン脂質のホスファチジルコリンを加水分解して、bio-lipidとして機能するホスファチジン酸を産生する。一方、反応系に一級アルコールが存在すると、PLDは加水分解反応よりもむしろPCのホスファチジル基を一級水酸基に転移してホスファチジルアルコールを産生するホスファチジル基転移反応を優位に触媒する。蛋白質構成成分のアミノ酸のうちセリンは一級水酸基を有しており、蛋白質分子中のセリン残基がPLDによってホスファチジル化されてその機能が修飾されるという、今までに例を見ない新規の蛋白質翻訳後修飾の可能性が考えられ、この点について検討した。その結果、以下のような結果が今までに得られた。現在までに同定されているPLD1とPLD2の二種類のPLDアイソザイムのうち、リコンビナントPLD2を調製し、これを[^<32>P]PCと遊離セリン存在下でインキュベートすると、[^<32>P]ホスファチジルセリンが産生され、PLD2は遊離セリンをホスファチジル化することが明らかとなった。さらに、リコンビナントPLD2を[^<32>P]PCとインキュベートすると、PLD2への[^<32>P]の取り込みが認められたが、活性欠失型PLD2への取り込みは認められなかった。これらの結果から、PLD2はその活性依存的に自己ホスファチジル化される可能性が示唆された。リコンビナントPLD2を[^<32>P]PC存在下、J774.1細胞の膜画分とインキュベートすると、数種類の蛋白質への[^<32>P]の取り込みが観察された。さらに、好中球の細胞膜PCを特異的に^<32>P標識して、fMLPで刺激すると、数種の蛋白質への^<32>Pの取り込みが見られた。このことから、細胞膜蛋白質がPLD2によりホスファチジル化される可能性が十分考えられる。

在生理条件下，磷脂酶 D (PLD) 水解磷脂酰胆碱（一种构成细胞膜的磷脂），产生磷脂酸，发挥生物脂质的作用。另一方面，当反应体系中存在伯醇时，PLD主要催化磷脂酰基转移反应，将PC的磷脂酰基转移到伯羟基上生成磷脂酰醇，而不是水解反应。构成蛋白质成分的氨基酸中，丝氨酸具有伯羟基，通过PLD对蛋白质分子中的丝氨酸残基进行磷脂酰化，修饰其功能，一种前所未有的新型蛋白质翻译方法考虑了后修饰的可能性。对此进行了调查。结果，迄今为止已获得以下结果。在迄今为止鉴定的两种PLD同工酶PLD1和PLD2中，制备重组PLD2并在游离丝氨酸存在下与[^ 32 P]PC温育，产生磷脂酰丝氨酸，并且发现PLD2使游离丝氨酸磷脂酰化。此外，当重组PLD2与[^ 32 P]PC一起温育时，[^ 32 P]掺入PLD2中，但不掺入活性缺陷的PLD2中。这些结果表明PLD2可能以活性依赖性方式被自身磷脂酰化。当在[^ 32 P]PC存在下将重组PLD2与J774.1细胞的膜级分一起温育时，观察到[^ 32 P]掺入几种蛋白质中。此外，当嗜中性粒细胞膜PC用^ 32 P特异性标记并用fMLP刺激时，观察到^ 32 P掺入几种蛋白质中。由此看来，细胞膜蛋白很可能被PLD2磷脂酰化。

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Local change in phospholipid composition at the cleavage furrow is essential for completion of cytokinesis

DOI：
10.1074/jbc.m504282200
发表时间：
2005-11-11
期刊：
JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子：
4.8
作者：
Emoto, K;Inadome, H;Umeda, M
通讯作者：
Umeda, M

Phospholipase D1-promoted release of tissue plasminogen activator facilitates neurite outgrowth

DOI：
10.1523/jneurosci.4850-04.2005
发表时间：
2005-02-16
期刊：
JOURNAL OF NEUROSCIENCE
影响因子：
5.3
作者：
Zhang, Y;Kanaho, Y;Tsirka, SE
通讯作者：
Tsirka, SE

細胞内シグナル伝達研究法

细胞内信号转导研究方法

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
影响因子：
0
作者：
F.Okahara;K.Itoh;M.Ebihara;M.Kobayashi;H.Maruyama;Y.Kanaho;T.Maeharma;Y.Zhang et al.;C.Kojima et al.;F.Okahara et al.;H.Watanabe et al.;H.Watanabe et al.;J.Sasaki et al.;金保安則;金保安則他
通讯作者：
金保安則他

Regulation of PTEN phosphorylation and stability by a tumor suppressor candidate protein