骨形成不全症の分子病態と治療に関する研究

成骨不全症的分子病理学及治疗研究

基本信息

批准号：
15659247
负责人：
田中弘之
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、骨形成不全症の予後判定とBisphosphonateを用いた治療の適応を的確に判断し、過不足のない治療を実現するとともに、いまだに明らかではないBisphosphonateの有効性の分子機序を解明することを目的に計画した。巨大遺伝子解析の効率化のためには、変異エクソンのスクリーニングが必須であり、そのためにDHPLCを用いたHetero duplex解析を導入しスクリーニング法を確立した。現在までに22家系のOI患者の遺伝子解析を行っており、当院通院中の患者のみならず日本全国より解析の問い合わせを受けるようになっている。DHPLCを用いたスクリーニングの効率は全PCR産物の10%でhetero-dupulex形成が認められそのうちの30%に塩基置換などが確認された。さらに、DHPLCの条件を最適化する必要がある。同定された変異と疾患重症度の関連については従来報告されているように、C端の変異のほうがN端より重症であることが明らかとなった。さらにII型に特異的な変異も同定された。一方、遺伝子解析の途上で、変異の場所の違いや変異の形の違いを体液中のコラーゲン代謝物によって推測することができるのではないかとの発想にいたった。即ち、重症型ではC端に変異があるためN端に形成されるピリジノリン架橋形成が著しく障害されるはずである。そこで、当院患者尿中のNTxとCTxを同時に測定することによってコラーゲン線維間に形成されるピリジノリン架橋の評価を試みた。その結果NTX/CTX値は0.5で重症型と軽症型を鑑別することが可能であるとの結論を得た。

这项研究旨在准确确定成骨不完美的预后和使用双膦酸盐的治疗指示，实现无过多或短缺的治疗，并阐明双膦酸盐疗效的分子机制，这仍然不清楚。为了提高巨型基因分析的效率，对突变外显子进行筛选是必不可少的，因此，引入了使用DHPLC的杂种双工分析来建立筛选方法。迄今为止，我们一直在对22名OI患者进行遗传分析，并且不仅从访问我们医院的患者，而且还来自日本各地的患者进行了有关分析的询问。观察到使用DHPLC筛选的效率在10％的总PCR产物中形成异质 - 杜普尔，并且在其中30％中证实了基础取代等。此外，需要优化DHPLC的条件。如前所述，已确定的突变与疾病严重程度之间的关联已表明，C末端的突变比N末端的突变更为严重。另外，还确定了II型特异性突变。另一方面，在遗传分析期间，我想到的是，可以通过体液中的胶原蛋白代谢产物来推断突变的位置和形状差异。也就是说，在严重的形式下，在C末端存在突变，因此在N末端形成的吡啶胺交联的形成显着受损。因此，我们试图通过同时测量患者尿液中的NTX和CTX来评估胶原纤维之间形成的吡啶胺交联。结果，可以得出结论，NTX/CTX值为0.5，这使得有可能区分严重类型和轻度类型。