悪性軟部腫瘍における腫瘍特異的転座遺伝子産物を標的とした抗腫瘍免疫の誘導

通过靶向恶性软组织肿瘤中肿瘤特异性易位基因产物诱导抗肿瘤免疫

• 批准号: 12770791
• 负责人: 川口 哲
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770791/
• 关键词: 免疫療法; 悪性軟部腫瘍; 遺伝子転座; 滑膜肉腫; SYT-SSX; 合成ペプチド

1.SYT-SSX合成ペプチドの作製:SYT-SSXのアミノ酸配列のうち、日本人に最も多いHLA-A24と結合する領域を同定した。SYT-SSX転座領域よりSS391ペプチド(PYGYDQIMPK)とSS393ペプチド(GYDQIMPKK)を合成し、SSX領域よりSS449bペプチド(AWTHRLRER)とSS4496ペプチド(AWTHRLRERK)を合成した。2.HLA-A24テトラマーによるペプチド特異的CTLの検出:HLA-A24/ペプチドテトラマーを作製した。HLA-A24陽性の症例(滑膜肉腫16例、滑膜肉腫以外の骨軟部肉腫患者10例、健常者10例)を解析の対象とし、テトラマーと反応するTリンパ球をFlowcytometoryを用いて検出した。健常者では0例、滑膜肉腫以外の骨軟部肉腫患者では1例においてTリンパ球がテトラマーと反応していた。滑膜肉腫患者16例の解析では、遠隔転移の既往歴または現病歴がある9例中6例において、テトラマーと反応するTリンパ球が高頻度(0.25%以上)に存在した。3.合成ペプチドによるCTLの誘導:滑膜肉腫患者4例の末梢血から、(SS391+393)ペプチドまたは(SS449a+b)ペプチド刺激によるCTL誘導を行った。HLA-A24/ペプチドテトラマーと反応するTリンパ球が高頻度に存在する滑膜肉腫患者2例よりCTLが誘導された。CTLはペプチド特異的にC1R-A^*2402細胞を殺傷した。また、SYT-SSX遺伝子とHLA-A24の両方を発現する滑膜肉腫株(Fuji、HS-SYII)を殺傷した。以上の結果より、滑膜肉腫患者では遠隔転移に伴いSYT-SSXペプチドを認識するTリンパ球が増加し、ペプチド刺激によりCTLを誘導できることが明らかとなった。

1. SYT-SSX合成肽的制备：在SYT-SSX的氨基酸序列中，我们鉴定了与HLA-A24结合的区域，该区域在日本人中最常见。从SYT-SSX易位区合成SS391肽(PYGYDQIMPK)和SS393肽(GYDQIMPKK)，从SSX区合成SS449b肽(AWTHRLRER)和SS4496肽(AWTHRLRERK)。 2.使用HLA-A24四聚体检测肽特异性CTL：制备HLA-A24/肽四聚体。对HLA-A24阳性病例（滑膜肉瘤16例、滑膜肉瘤以外的骨和软组织肉瘤患者10例、健康受试者10例）进行分析，采用流式细胞术检测与四聚体反应的T淋巴细胞。 0例健康受试者和1例滑膜肉瘤以外的骨软组织肉瘤患者T淋巴细胞与四聚体发生反应。在对 16 名滑膜肉瘤患者进行的分析中，与四聚体反应的 T 淋巴细胞在 9 名有远处转移病史或当前病史的患者中以高频率（0.25% 或更高）出现。 3.合成肽诱导CTL：通过(SS391+393)或(SS449a+b)肽刺激，从4名滑膜肉瘤患者的外周血中诱导CTL。在两名滑膜肉瘤患者中诱导了 CTL，这些患者中经常存在与 HLA-A24/肽四聚体反应的 T 淋巴细胞。 CTL 以肽特异性方式杀死 C1R-A^*2402 细胞。我们还杀死了表达 SYT-SSX 基因和 HLA-A24 的滑膜肉瘤系（Fuji，HS-SYII）。上述结果表明，滑膜肉瘤因远处转移而识别SYT-SSX肽的T淋巴细胞增多，且肽刺激可诱导CTL。