細胞の容積調節に関わる容積感受性塩素イオンチャネルの同定及びその開口機構の解明

鉴定参与细胞体积调节的体积敏感氯离子通道并阐明其开放机制

• 批准号: 12770027
• 负责人: 赤塚 結子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770027/
• 关键词: 容積感受性; Clチャネル; 細胞骨格; 容積感受性Cl^-チャネル; RVD; カラムクロマトグラフィー; ATP

容積感受性Cl電流は細胞の体積が正常であるときには全く見られず、細胞が低張浸透圧下で膨張した時にのみ観察され、その開口機構には細胞骨格の関与が示唆されている。報告者は、容積感受性Clチャネルが低浸透圧刺激を受けて細胞骨格系と相互作用して開口した際には細胞膜から溶出されにくくなるのではないかと考えた。そこで、容積感受性Cl電流が非常によく観察される、ヒト小腸由来の培養細胞であるIntestin407細胞を用いて、正常浸透圧下にある細胞と低浸透圧刺激を受けた細胞から膜画分を取り、界面活性剤に対する溶解度が異なる蛋白質があるかどうかを調べた。その結果、低浸透圧刺激を加えた細胞から抽出した膜画分中に特異的に見られる蛋白質を見出し、その内部アミノ酸配列を解析し、同定した。現在この蛋白質のcDNAを単離し、培養細胞に強制発現させて、容積調節に関わるかどうかを検討中である。

当细胞体积正常时，根本观察不到体积敏感的Cl电流，只有当细胞在低渗渗透压下扩张时才能观察到，这表明细胞骨架参与了开放机制。作者假设，当体积敏感的 Cl 通道在接受低渗刺激后打开并与细胞骨架系统相互作用时，它们可能会变得难以从细胞膜上洗脱。因此，使用来自人小肠的培养细胞Intestin 407细胞，其中经常观察到体积敏感的Cl电流，从正常渗透压下的细胞和受到低渗刺激的细胞收集膜部分，我们研究了是否存在这种情况。蛋白质在表面活性剂中的溶解度不同。结果，我们在从受到低渗刺激的细胞中提取的膜组分中发现了一种特异的蛋白质，并分析和鉴定了其内部氨基酸序列。我们目前正在通过分离 cDNA 并迫使其在培养细胞中表达来研究该蛋白的 cDNA 是否参与体积调节。