ラット精巣形成不全症病因遺伝子の探索:候補遺伝子検索とBACコンティグの作製

寻找导致大鼠睾丸发育不全的基因：候选基因搜索和 BAC 重叠群创建

基本信息

批准号：
12760204
负责人：
鈴木浩悦
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Nippon Veterinary and Life Science University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760204/
关键词：
hypogonadism gene mapping testis rat

项目摘要

本研究は精巣形成不全症(HGN)ラットの原因遺伝子(hgn)を、ポジショナルクローニング法あるいはポジショナルキャンディデート法により同定しようと言うものである。本年度は、HGN系統とBrown Norway系統との間の外交配から得られたF1とHGN系統のhgn/hgnとの戻し交配で得られた約600個体の雄について、hgn遺伝子座周辺のマイクロサテライトを用いてタイピングを行い、hgn存在領域を含むファインマップを作成した。同時にRat/Hamster Radiation Hybrid Panelを用いてhgn存在領域のRHマップを作成した。これらの結果から、hgn遺伝子座がD10Rat30とD10Rat68との間の約0.36cM(22.6.cR)の領域に存在し、D10Rat69、D10Arb9(Aldo3)、およびwhn(winged helix of nude)遺伝子座と完全連鎖していることが判明した。この情報をもとに、YAC(酵母人口染色体)ライブラリーをPCRでスクリーングしたが、選択したYACライブラリーからはhgn存在領域を網羅する単一のクローンを見いだすことはできなかった。来年度は、複数のクローンによるコンティグを完成させるべくスクリーニングを行うと同時に、由来の異なるYACに関してのスクリーニングを検討している。また、ラット第10染色体のhgn存在領域と相同なマウス第11染色体上の領域にマップされている複数のEST(D11Ertd18e、D11Ertd250e、D11Ertd72eなど)あるいは機能的遺伝子(Ywhae、Supt6h、Ube2b-rs2など)について、精巣での発現の調査、シーケンス、サザンによるタイピング等を行ったが、現在までのところ有力な候補は見出されていない。来年度も引き続き候補遺伝子検索を継続する予定である。

本研究旨在利用定位克隆或定位候选方法鉴定睾丸发育不全（HGN）大鼠的致病基因（hgn）。今年，我们调查了约 600 只雄性的 hgn 基因位点周围的微卫星，这些雄性是通过将 HGN 系和布朗挪威系之间的异交获得的 F1 与 HGN 系的 hgn/hgn 进行回交而创建的，包括 HGN 区域。。同时，我们使用大鼠/仓鼠辐射混合面板创建了 HGN 区域的 RH 地图。这些结果表明，hgn 基因座存在于 D10Rat30 和 D10Rat68 之间约 0.36 cM (22.6.cR) 的区域，并且与 D10Rat69、D10Arb9 (Aldo3) 和 whn (裸翅螺旋) 基因座完全连锁。确实如此。基于该信息，通过PCR筛选YAC（酵母人工染色体）文库，但从所选YAC文库中没有发现覆盖HGN区域的单个克隆。明年，我们将筛选多个克隆的完整重叠群，同时我们正在考虑筛选不同来源的YAC。此外，多个EST（D11Ertd18e、D11Ertd250e、D11Ertd72e等）映射到小鼠11号染色体上的一个区域，该区域与大鼠10号染色体的hgn区域同源，我们研究了睾丸中功能基因（Ywhae、Supt6h、Ube2b-rs2 等）的表达，对它们进行了测序，并进行了 Southern 分型，但迄今为止尚未发现有希望的候选基因。我们计划明年继续寻找候选基因。