タンパク質―リガンド間相互作用における電気化学的評価とセンシングに関する研究

蛋白质-配体相互作用的电化学评估和传感研究

基本信息

批准号：
12740402
负责人：
菅原一晴
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

1.内分泌攪乱物質(EDCs)に関しての新しい電気化学的スクリーニングを開発した。エストロジェンレセプタ(ER)に対してEDCsの結合キャパシティーを評価するために、電極活性物質としてドウノマイシンでラベル化した17β-エストラジオールの調製を行った。ラベル化エストラジオール(LE)の電気化学的検出感度は、ドウノマイシンと比較して高いものとなった。LEとERの相互作用は、LEのERに対する特異的結合によりLEの電極応答の減少によって観察される。また、決まった濃度のLEと種々の濃度の17β-エストラジオールをERの限定された結合サイト競争させるとLEのピーク電流値が増加した。1x10^<-8>Mの17β-エストラジオールの相対標準偏差は約10%であった(n=7)。EDCとERの結合力は、17β-エストラジオール-ER相互作用との比較によって評価された。ビスフェノールA、p-ノニルフェノール、p,p-DDTがテスト化合物として使われた。すべてのテスト化合物はERとある程度の結合することが示された。この電気化学的結合アッセイは結合したLEとしていないものについて分離操作なしでERに対してのEDCsの結合キャパシティーを評価する方法となる。2.静電的相互作用に基づいたモリブデン酸イオンのボルタンメトリーがキチン膜で被覆されたグラッシーカーボン電極によって開発された。この手法の特徴は以下の通りである。第1は、モリブデン酸イオンの濃縮がキチンとの静電的、疎水的相互作用に基づいている。第2には、共存物の影響は測定溶液と濃縮溶液が異なっているため、測定における影響が少ない。加えて、この電極の性質を以前に報告したキチン修飾カーボンペースト電極の結果と比較検討した。提案した方法はカナダ標準局発行海水試料中のモリブデン酸イオンの定量に応用された。

1。我们开发了内分泌干扰物质（EDC）的新电化学筛选。为了评估EDCS与雌激素容器（ER）的结合能力，我们制备了17β-雌二醇，该雌二醇被标记为Donomycin作为电极活性材料。标记的雌二甲（LE）的电化学检测敏感性高于狄奥米霉素的敏感性。 LE和ER之间的相互作用是通过对LE的电极响应的减少来观察到的。此外，当LE的ER的有限结合位点竞争增加了LE的峰值电流值时，固定浓度和17β-雌二醇的LE被交换。 1x10^<-8> m的17β-雌二醇的相对标准偏差约为10％（n = 7）。通过与17β-雌二醇 - ER相互作用进行比较来评估EDC和ER之间的结合力。将双酚A，P-Nilfenol，P-DDT用作测试化合物。结果表明，所有测试化合物均粘合到ER。这种电化学结合测定是一种评估EDC与ED的结合能力而无需分离操作的方法。 2。基于静电相互作用的钼酸酯的螺栓测定法是通过涂有几丁质膜的Glabcy碳电极开发的。该方法的特征如下。首先，钼离子的浓度基于与几丁质的静态和疏水相互作用。其次，由于测得的溶液和浓缩溶液不同，共存的效果在测量方面是不同的，因此测量的效果很小。另外，将电极的性质与先前报道的碳糊电极的结果进行了比较。提出的方法应用于加拿大标准局中钼离子的定量量。