1分子イメージングによる生体分子の時間的・空間的動態の解析

使用单分子成像分析生物分子的时空动态

基本信息

批准号：
11780542
负责人：
後藤聡
金额：
$ 1.41万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780542/
关键词：
Notch GFP 発生ショウジョウバエ細胞運動

项目摘要

分泌蛋白や膜蛋白の多くは、Golgi体において多様な糖鎖修飾を受けている。近年のショウジョウバエを用いた遺伝学的な解析から、糖鎖修飾が発生において重要な役割果たしていることが明らかとなってきた。申請者は、Golgi体に局在する新規の糖核酸輸送体(UST74C)を同定し、その変異体の解析を行った。変異体の表現型は、多様な細胞間相互作用に用いられているNotch受容体の変異形質によく似ていた。糖核酸は糖鎖修飾の基質であるので、この変異体においては糖修飾に異常が生じていると考えられた。そこで、変異体の蛋白質の糖鎖構造を幅広く調べたところ、Notch受容体上の糖鎖構造に特に異常が生じていた。なぜ、特定の蛋白質の糖鎖構造に異常が生じるかについて解析するために、この分子の細胞における分布を調べたところ、すべてのGolgi体ではなく一部のGolgi体にのみ局在していることがわかった。UST74Cが一部のGolgi体に局在する過程を観察するために、UST74CにGFP(Green Fluorescent Protein)を融合した遺伝子をもつトランスジェニックショウジョウバエを作成し、Golgi体の細胞内での動態を観察する計画を進めている。このことにより、Golgi体の多様性を生み出すメカニズムを解くことができると考えている。この研究は、細胞内小器官の動態を遺伝学的にアプローチできる系として、非常にユニークなものである。

许多分泌和膜蛋白在高尔基体中经历了多种糖基化修饰。使用果蝇的最新遗传分析表明，聚糖修饰在发育中起着重要作用。申请人确定了一种新型的糖基化核酸转运蛋白（UST74C），并分析了突变体。突变表型与用于多种细胞相互作用的Notch受体的突变性状非常相似。由于糖基化的核酸是用于糖基化修饰的底物，因此人们认为该突变体中发生糖基化异常。因此，当我们研究突变体蛋白质的聚糖结构时，Notch受体的聚糖结构中存在特定的异常。为了分析为什么观察到特定蛋白质的糖基化结构异常，我们研究了该分子在细胞中的分布，发现它仅位于某些高尔基体，不是所有的高尔基体。为了观察UST74C定位于某些高尔基体的过程，我们计划创建一个转基因果蝇，该果蝇带有一个将UST74C与GFP（绿色荧光蛋白）融合的基因，并观察细胞内高尔基体的动态。这使我们能够解决在高尔基体中产生多样性的机制。这项研究非常独特，作为一个系统，可以为细胞内细胞器的动力学提供遗传方法。