シリル化合物によるシスチン含有ペプチドの実用的合成法の開発とその応用

甲硅烷基化合物合成含胱氨酸肽的实用方法的建立及其应用

• 批准号: 11771402
• 负责人: 藤原 洋一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771402/
• 关键词: シリルクロリドースルホキシド法; Trp含有シスチンペプチド; 位置選択的架橋反応; エンドセリン-1; ヨウ素酸化法; インドール保護基; Fmoc型固相合成; トリフルオロメタンスルホン酸; ソマトスタチン; ジスルフィド結合形成反応

平成12年度の研究実施結果について以下に述べる。本年度は前年度に確立した方法論,即ちTrpのインドール環の保護基として2,4-dimethylpent-3-yloxycarbonyl(Doc)基を使用し、シリルクロリドースルホキシド法と既存のジスルフィド結合形成反応を組み合わせて架橋した後、トリフルオロメタンスルホン酸(TFMSA)処理で、Doc基の除去を行うといった手順で、複数のジスルフィド架橋を有するペプチドの位置選択的な化学合成を行った。1.上述のペプチドの具体例として、その分子内に1個のTrp残基と2個のジスルフィド結合を有するエンドセリン-1(ET-1)を選択した。このペプチドはその完全還元体から空気酸化法にてランダムにジスルフィド結合を形成させた場合、約30%もの架橋異性体が副生が避けられない。よって、効率的に目的のET-1を得るためには、位置選択的架橋反応が不可欠なものとなり、ET-1は今回の方法論を評価するモデルとして最適であると考えた。2.各保護ペプチド樹脂の構築はFmoc法にて行い、トリフルオロ酢酸にて最終脱保護後、ヨウ素酸化法にて第1のジスルフィド結合(外側)を形成させ、続いて、シリルクロリドースルホキシド法にて2本目のジスルフィド架橋(内側)を形成、さらにTFMSA処理でTrpのDoc基の選択除去、精製後、最終品であるET-1を高純度で収率よく得ることができた。3.また、2本のジスルフィド結合を2とは逆の順序で形成させる場合でも、ほぼ同程度の純度・収率の中間体の生成が認められ、全体を通しての収率は2の場合と比較して約3倍もの高収率であった。以上、Trp含有シスチンペプチドを効率的の合成する際の問題点をほぼ解決できた。今後は、通常では合成困難な新規機能を有する人工ペプチド・蛋白質の合成実験を行っていく予定である。

2000 年度的研究结果如下。今年，我们沿用了去年建立的方法学，即用2,4-二甲基戊-3-基氧基羰基（Doc）基团作为Trp吲哚环的保护基团，采用氯硅烷亚砜法和现有的二硫化物法。我们通过结合 fido 键形成反应进行交联，然后通过三氟甲磺酸 (TFMSA) 处理去除 Doc 基团，对具有多个二硫桥的肽进行区域选择性化学合成。 1.作为上述肽的具体例子，选择分子内具有1个Trp残基和2个二硫键的内皮素-1(ET-1)。当完全还原形式的肽通过空气氧化随机形成二硫键时，不可避免地会产生约 30% 的交联异构体作为副产物。因此，为了有效地获得所需的 ET-1，区域选择性交联反应是必不可少的，我们认为 ET-1 是评估我们的方法的最佳模型。 2.采用Fmoc法构建各保护肽树脂，最终用三氟乙酸脱保护后，采用碘氧化法形成第一个二硫键（外层），然后添加氯硅烷。采用亚砜法形成第二个二硫桥（内侧），并采用TFMSA处理选择性去除Trp的Doc基团后，我们能够获得高纯度、高产率的最终产物ET-1。 3.此外，即使以与2相反的顺序形成两个二硫键，也会产生纯度和收率大致相同的中间体，并且总收率与2相比，收率大约高出3倍以前的方法。如上所述，我们几乎解决了高效合成含Trp的胱氨酸肽的问题。未来，我们计划对具有正常合成困难的新功能的人工肽和蛋白质进行合成实验。

项目成果

Yoichi Fujiwara: "A novel synthetic approach of tryptophan-containing-cystine peptides by regioselective disulfide bond-forming reaction using the silyl chloride-sulfoxide system"YAKUGAKU ZASSHI. 120・2. 197-205 (2000)

Yoichi Fujiwara：“使用氯硅烷-亚砜系统通过区域选择性二硫键形成反应合成含色氨酸的胱氨酸肽”YAKUGAKU ZASSHI 120・2（2000）。