神経軸索再生過程における微小管制御機構

神经轴突再生过程中的微管控制机制

基本信息

批准号：
10780435
负责人：
倉知正
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1.再生過程における神経突起の動態を調べるために、ラット上頚神経節細胞培養系を用いてビデオコントラスト微分干渉顕微鏡下で集光したレーザー光を神経突起に照射、突起全体を切断した。切断後、神経突起は退縮を開始した。このうち約半数の突起が切断後1時間以内に再生に転じた。再生時の突起の伸長速度は、切断前の速度とほぼ同じであった。また、枝分かれした突起の片方をレーザー光により切断した際、切断された突起は退縮を開始したが、もう一方は一時的に活動を停止するが退縮することなく成長を続けた。こららのことから、再生過程における細胞骨格の再構成は損傷を受けた突起内でのみ行われることがわかった。2.神経突起切断後の突起内微小管の性質を知るために、界面活性剤で細胞膜を除去した後に固定、蛍光抗体法により微小管を構成するチューブリンの修飾状態(チロシン化およびアセチル化)を調べた。切断直後の突起内ではチロシン化およびアセチル化チューブリンから構成される微小管がともに観察され、それらの分布は正常な突起内の微小管の場合とほぼ同様であった。切断後5分以上経過した再生前の突起内では、大部分の微小管はアセチル化チューブリンから構成されており、チロシン化チューブリンからなる微小管はほとんど見られなかった。これらの結果から、チロシン化チューブリンから構成される微小管に比べてアセチル化チューブリンから構成される微小管が安定であり、切断から再生までの神経突起の形態を維持する上でアセチル化チューブリンから構成される微小管が重要な役割をしていることわかった。3.神経突起切断後の再生過程における微小管の分布変化のダイナミクスを調べるために、蛍光ラベルしたチューブリンを細胞内に注入して蛍光観察する実験系を構築した。

1。为了检查播放过程中神经突起的动力学，通过神经叶子辐射了视频对比干扰显微镜下收集的激光光，并切断了整个突出。断开连接后，神经突出开始签约。切割后的一小时内，大约有一半转身玩。播放过程中突起的延长速度几乎与切割前的速度相同。此外，当一个分支突起被激光灯切割时，切割突出开始恢复，而另一个则继续生长而没有暂时停止。从那时起，发现在播放过程中细胞骨骼的重建仅在受损的突出中进行。 2。为了了解切割神经突出后震颤内突出的特性，酪氨酸的迁移是用表面活性剂去除细胞膜后固定的，并通过荧光抗体法（酪氨酸和乙酰化构成微电流））。在切割后立即进行突出中，观察到由酪氨酸和乙酰化小管蛋白组成的微管，它们的分布几乎与正常突起相同。大多数小管由乙酰化小管组成，切割前超过5分钟，在播放前的突起中很少见到由酪氨酸小管蛋白组成的小管。基于这些结果，与由酪氨酸小管组成的微管蛋白相比，由乙酰化小管组成的微管保持稳定，并保持神经突起的形式从切割到播放。 3。为了检查神经突起后播放过程中微细胞分布的分布的动力学，将荧光管道安装到细胞中，并构建了观察到的荧光。