血液網膜関門新規実験系の開発と輸送機能解析

新型血视网膜屏障实验系统的开发及转运功能分析

• 批准号: 10771316
• 负责人: 細谷 健一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771316/
• 关键词: 血液網膜関門; 眼; 条件的不死化細胞株; P-糖蛋白質; 乳酸輸送; モノカルボン酸輸送; MCT1; MCT2; 温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラット; 網膜; T-抗原; 不死化細胞クローン; GLUT-1; グルコース輸送; 血液網膜関門; 眼; 条件的不死化細胞株; P-糖蛋白質; 乳酸輸送; モノカルボン酸輸送; MCT1; MCT2; 温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラット; 網膜; T-抗原; 不死化細胞クローン; GLUT-1; グルコース輸送

温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラットから樹立した条件的不死化網膜毛細血管内皮細胞(TR-iBRB)はRT-PCR法により血管内皮細胞のマーカーであるvon Willebrand factor mRNAの発現が示された。さらに、acetylated LDLの取り込みによりscavenger receptorの発現が示唆された。Western blot法によりP-糖蛋白質が発現していること、及びRT-PCR法によりそのmRANであるmdr1a,mdr1b,mdr2が発現していることが示された。TR-iBRBにおける[^<14>C]L-lactateの取り込みはpH 依存性、温度依存性、及び濃度依存性(Km=1.7mM)を示した。この取り込みは、エネルギー代謝阻害剤であるsodium azide、2,4-dinitrophenolにより有意に阻害された。さらにH^+/モノカルボン酸共輸送系を阻害するα-cyano-4-hydroxycinnamic acid及びプロトノフォアであるFCCPにより有意に阻害された。一方、DIDS、NA^+非存在下では阻害されなかった。種々の芳香族及び脂肪族のモノカルボン酸において[^<14>C]L-lactateの取り込みは阻害されたことにより、H^+濃度勾配を駆動力とするモノカルボン酸輸送系が機能していることが示唆され、RT-PCR法によりmonocarboxylate transporter1(MCT1)及びMCT2の発現が示された。さらに、NHE1mRNAの発現が示され、amilorideにより[^<14>C]L-lactateの取り込みは阻害された。以上の結果から、TR-iBRB2はH^+/L-lactate共輸送系が機能していることが明らかとなり、NHEがプロトン濃度勾配を形成していることが示唆された。

通过温度敏感的SV40T抗原转基因大鼠建立的条件永生的视网膜毛细血管内皮细胞（TR-IBRB）显示出表达von willebrand因子mRNA，这是血管内皮细胞的标志物。此外，乙酰化LDL的摄取表明了清道夫受体的表达。蛋白质印迹方法表明表达了P-糖蛋白，RT-PCR方法表明其MRAN，MDR1A，MDR1B和MDR2表示。在TR-IBRB中摄取[^<14> c] L-肽材料显示pH依赖性，温度依赖性和浓度依赖性（km = 1.7mm）。能量代谢抑制剂叠氮化钠，2,4-二硝基苯酚可显着抑制这种摄取。此外，H^+/单羧酸共转运系统受到α-Cyano-4-羟基霉素酸和Protonophore FCCP的显着抑制。另一方面，在没有DID或Na^+的情况下，它没有被抑制。在各种芳香族和脂肪族单一羧酸酸中抑制了[^<14> c] L-乳酸掺入的抑制作用，这表明由H^+浓度梯度驱动的单核酸转运系统正常运行，并且单核酸转运器1（MCT1）和MCT2的表达是通过rt-rt-PCR所证明的。此外，显示了NHE1 mRNA的表达，淀粉样蛋白抑制了[^<14> c] L-乳酸的摄取。上述结果表明，TR-IBRB2中的H^+/L-肽座共传输系统正在起作用，这表明NHE形成了质子浓度梯度。