胃粘膜上皮細胞に新たに見出された細胞保護関連蛋白質の構造と活性に関する研究

新发现的胃粘膜上皮细胞细胞保护相关蛋白的结构和活性研究

• 批准号: 09772008
• 负责人: 高橋 悟
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09772008/
• 关键词: 胃粘膜上皮細胞; 細胞保護; グルタチオン; ヘムオキシゲナーゼ; 抗酸化作用; 酸化ストレス

著者は抗潰瘍薬レミノプラゾール(LMP)が胃上皮細胞に4種の蛋白質を誘導合成させることにより、細胞を傷害耐性状態にすることを見出した。そこで、これらの蛋白質の単離を2次元電気泳動により試みたが、成功しなかった。一方、インドメタシンによる胃上皮細胞傷害の発生過程において、細胞内還元型グルタチオン(GSH)含量の低下がみられるが、LMPを前処理しておくとGSH含量の低下が抑制されることが判明した。近年、ヘムオキシゲナーゼは抗酸化物質の産生を触媒することなどから、炎症の終結因子のひとつとして注目されているが、誘導型のヘムオキシゲナーゼ(HO-1)は分子量32Kである。LMPにより誘導される蛋白質のひとつであるp35は誘導合成される点や分子量がHO-1に類似していることや、上述したようにLMP処理細胞では酸化抑制機構が働いた点を考慮すると、p35がHO-1である可能性が推察された。そこで、p35とHO-1との異同について検討した。胃上皮細胞のHO活性を測定したところ、通常は活性が非常に低値であったが、LMP前処理細胞では有意にHO活性が増加した。蛋白質合成阻害薬シクロへキシミドやmRNA合成阻害薬アクチノマイシンDはLMPによるp35の合成を阻害するが、同時にLMPによるGSH含量低下抑制に対して阻害効果を示した。さらにこれらの薬物はHO活性の発現を強く阻害した。そこでさらに抗HO抗体によるウエスタンブロットを行ったところ、無処理細胞ではHO-1は検出されなかったが、LMPによりHO-1の発現の誘導が認められた。一方、HO-2はLMPの処理に関係なく発現がみられたが、そのレベルに変化はなかった。以上の結果から、LMPは胃上皮細胞にHO-1の発現を誘導し、その抗酸化作用が細胞保護作用に奇与することが強く示唆された。

作者发现，抗硫酸药物Remino prazol（LMP）通过诱导四种类型的蛋白质对胃表皮细胞诱导细胞耐损伤。因此，这些蛋白质效果是通过两个维度的电子游泳尝试的，但没有成功。另一方面，在胃上皮细胞SC的发生中，具有吲哚宁，细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的量减少，但是在LMP处理之前，发现GSH含量的降低减少了。近年来，由于抗氧化剂催化引起的炎症的最终因素之一吸引了Hemooxygyase，但诱导的血氧酶（HO-1）的分子量为32K。 p35，是LMP，p35衍生的蛋白质之一，p35是诱导和合成的事实​​，分子量与HO-1相似，并且在LMP处理的细胞中起作用的分子量相似，这一事实是。假定P35可能是HO-1。因此，我们检查了p35和HO-1之间的差异。当测量胃上皮细胞的HO活性时，该活性通常非常低，但是在LMP预处理细胞中，HO活性显着增加。蛋白质合成抑制性药物环节和mRNA合成抑制性放线症D抑制LMP抑制p35的合成，但也抑制了LMP抑制GSH含量的抑制作用。此外，这些药物强烈抑制了HO活性的表达。因此，在未处理的细胞中进一步检测到具​​有抗HO抗体的蛋白质印迹，但LMP表明HO-1的表达。另一方面，无论LMP处理如何，HO-2都被表示，但是该级别没有变化。基于上述结果，强烈建议LMP诱导HO-1对胃上皮细胞的表达，其抗氧化作用对细胞保护很奇怪。

项目成果

Takahashi S.et al.: "Leminoprazole protects cultured gastric mucosal cells against damage caused by ethanol,indomethacin and taurocholate" Pharmacology. 54. 118-126 (1997)

Takahashi S.et al.：“来米诺拉唑保护培养的胃粘膜细胞免受乙醇、吲哚美辛和牛磺胆酸盐造成的损害”药理学。