口腔内組織のHIVレセプターの唾液由来蛋白質によるHIV結合阻害に関する研究

唾液源蛋白抑制口腔组织中HIV受体结合的研究

• 批准号: 09771559
• 负责人: 王 宝禮
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771559/
• 关键词: HIV; CD4; 口腔由来細胞

本研究の背景はHIVが経口感染しない理由から唾液成分の生体防御機能に着眼し、さらに唾液由来の物質が口腔内の組織に存在すると思われるHIVレセプターに対してアゴニストの働きや、そのレセプターを障害しているのではないかという仮説をたてた。この仮説の証明から、HIVとレセプターの結合阻害を唾液由来物質が可能であるならばエイズの感染阻害薬の開発の道の可能性を示唆するものとなるであろう。その第一段階として感染防御機構の解明のうえでもレセプターの同定は極めて重要である。本研究では口腔内組織のCD4の検出を試みた。口腔内の細胞はヒト歯牙を抜去時に歯牙に付着した歯肉片より歯肉上皮細胞、歯肉線維芽細胞、歯根膜線維芽細胞を分離しOut growth法で継体培養を行った。それぞれの細胞を用いウエスタンブロット法とフローサイトメトリー法で分析した。すなわち、ウエスタンブロット法では坑ヒトCD4抗体を、フローサイトメトリー法ではFITC標識坑ヒトCD4抗体のそれぞれを一次抗体とし細胞との反応を検討した。ウエスタンブロット法では坑ヒトCD4抗体との反応はみられなかった。一方フローサイトメトリー法では細胞にFITC標識坑ヒトCD4抗体との反応がみられた。これらの相違は分析法による感度の違いと考えられるが、フローサイトメトリー法で歯肉上皮細胞、歯肉線維芽細胞、歯根膜線維芽細胞の細胞膜上にCD4の存在が確認できた。以上の口腔内細胞にCD4が確認されたことからHIVがこれらの細胞と結合することが考えられることになる。

这项研究的背景是关注唾液成分的生物防御功能，这也是艾滋病毒不会通过口腔传播的原因。此外，唾液衍生物质对艾滋病毒受体的激动作用，被认为存在于他推测他可能有残疾。从这一假设的证明来看，如果唾液来源的物质能够抑制HIV与受体的结合，这将为开发抑制艾滋病感染的药物提供一条可能的途径。作为第一步，识别受体对于阐明感染防御机制极其重要。在这项研究中，我们尝试检测口腔组织中的 CD4。对于口腔内细胞，从拔除人牙齿时附着在牙齿上的牙龈碎片中分离出牙龈上皮细胞、牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞，并使用外生长法进行传代培养。通过蛋白质印迹和流式细胞术分析每个细胞。即，在Western印迹中使用抗人CD4抗体作为一抗，在流式细胞术中使用FITC标记的抗人CD4抗体作为一抗来研究与细胞的反应。 Western blotting显示与抗人CD4抗体无反应。另一方面，流式细胞术显示细胞与FITC标记的抗人CD4抗体发生反应。虽然这些差异被认为是由于分析方法的灵敏度差异所致，但通过流式细胞术，在牙龈上皮细胞、牙龈成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞的细胞膜上确认了CD4的存在。由于CD4在上述口腔细胞中得到证实，因此HIV有可能与这些细胞结合。