歯の発生におけるL3遺伝子の役割の解析

L3基因在牙齿发育中的作用分析

基本信息

批准号：
09771498
负责人：
加藤穣慈
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771498/
关键词：
歯胚発生遺伝子 LIM in situ ハイブリダイゼーションマウス RNA

项目摘要

前年度には、歯の発生過程におけるL3遺伝子の発現と消長について、in situハイブリダイゼーション法により明らかにした。そこで本年度は、培養歯胚を用いて、L3遺伝子が歯の発生に及ぼす影響を形態学的に明らかにした。胎齢12日のICRマウスの胎仔より、無菌的に下顎第一臼歯歯胚を摘出し培養した。次に、L3遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、培養歯胚でのL3遺伝子発現阻害実験をおこなった。まず、培養歯胚にL3遺伝子に対するアンチセンスの有効濃度について検討した結果、至適濃は度20μMolであることがわかった。歯胚を、1日間培養した翌日よりアンチセンスを添加し始めることが、最も有効であることが判明した。そこで、摘出した歯胚を、47、11および14日間培養した。その結果、アンチセンス添加による影響は、培養開始4〜7日ではほぼ正常に発達するものの、11日目以降には正常な形態は認められなかった。アンチセンスを添加し培養した歯胚は、上皮組織に比べて間葉組織の増殖分化が強く抑制され、正常な歯胚の形成は認められなかった。以上より、L3遺伝子は歯の発生段階に応じて、部位及び時期特異的に発現することが示された。さらに、L3遺伝子に対するアンチセンスを用いたL3遺伝子発現阻害実験により、L3遺伝子は、歯胚間葉組織の増殖と分化に必須な因子であり歯胚の形態形成に重要な役割を果たしていることが明らかになった。

去年，我们利用原位杂交方法阐明了L3基因在牙齿发育过程中的表达和进化。因此，今年，我们利用培养的牙胚从形态学上阐明了L3基因对牙齿发育的影响。从 12 天大的 ICR 小鼠胎儿中无菌取出下颌第一磨牙牙胚并进行培养。接下来，我们进行了一项实验，使用针对 L3 基因的反义寡核苷酸抑制培养的牙胚中的 L3 基因表达。首先，我们研究了培养牙胚中L3基因反义的有效浓度，发现最佳浓度为20 μMol。结果发现，最有效的方法是在牙胚培养一天后的第二天开始添加反义核酸。因此，提取的牙胚分别培养47天、11天和14天。结果，反义添加的效果是，尽管在培养开始后4至7天出现几乎正常的发育，但在第11天之后未观察到正常的形态。在添加反义物培养的牙胚中，间质组织的增殖和分化比上皮组织的增殖和分化受到更强烈的抑制，并且没有观察到正常的牙胚形成。由上可知，L3基因根据牙齿的发育阶段而进行位点特异性和时间特异性表达。此外，使用针对L3基因的反义的L3基因表达抑制实验表明，L3基因是牙胚间充质组织增殖和分化的必需因子，并且在牙胚形态发生中发挥重要作用。