TGF-βシグナル伝達に関わる分子の消化器癌における異常の解析及び癌治療への応用

胃肠癌TGF-β信号相关分子异常分析及其在癌症治疗中的应用

基本信息

批准号：
09770403
负责人：
西田直生志
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770403/
关键词：
肝細胞癌癌抑制遺伝子 Smad1 Smad2 Smad4 TGF-β p15^<INK4B>消化器癌分子生物学

项目摘要

1) ヒト肝細胞癌(肝癌)における第4染色体欠失の意義を検討するため、76症例の肝癌組織及びその非癌部を用い、第4染色体上のSmad1遺伝子の突然変異の有無をRT-PCR-SSCP法にて解析した。Smad1遺伝子(CDNA)のMH2ドメインに3組のPCRPrimerを設定しSSCP法を施行したが、肝癌症例でSmad1遺伝子に異常が認められた例はなかった。次にRNAの得られた36症例の肝癌において、Smad1遺伝子の発現を半定量的PCRを用いて検討した。半定量的PCRはβ-アクチンの発現をコントロールとして用い、26サイクルのPCRを行い判定した。その結果、非癌部に比し癌部で発現量の低下が認められた症例はなかった。一方これらの症例における第4染色体欠失の頻度はFGA座位で27%(PCR-RFLP法)、FABP座位で16%(PCR-RFLP法)、D4S125座位で12%(サザンブロット法)、D4S1537座位で20%であった。上記より肝癌の約2割に第4染色体欠失が認められるが、Smad1遺伝子の異常は認められなかった。2) 同様にSmad2、Smad4、TGF-βタイフIIレセプターの突然変異をRT-PCR-SSCP法にて解析したが、異常の認められた例はなかった。3) 上記の肝癌症例において、TGF-βシグナル伝達に関わる分子であるp15^<INK4B>遺伝子の異常の有無を解析した。PCRを用いて解析した結果p15^<INK4B>遺伝子の欠失が認められた例はなかった。しかしp15^<INK4B>遺伝子でプロモー夕のメチル化を、メチル化特異的PCR法にて解析した結果、44例中5例にプロモーターのメチル化が認められた。現在これらの症例において発現の低下の有無をウエスタンブロット法にて確認している。

1）研究4染色体缺失在人肝细胞癌（肝癌）中的重要性，使用RT-PCR-SSCP，使用了76例肝癌组织及其非癌性区域的肝癌组织及其非癌性区域来分析SMAD1基因中SMAD1基因中的存在或不存在。在SMAD1基因（cDNA）和SSCP的MH2结构域中设置了三对PCRPRIMER，但没有肝癌病例在SMAD1基因中表现出异常。接下来，使用半定量PCR在36例RNA获得肝癌的情况下检查了SMAD1基因的表达。使用β-肌动蛋白表达作为对照，通过PCR的26个循环确定半定量PCR。结果，与非癌性区域相比，没有病例显示出癌区域的表达水平降低。另一方面，在FGA基因座（PCR-RFLP方法）中，4染色体删除的频率为27％，在FABP基因座（PCR-RFLP方法）为16％，D4S125基因座（Southern Blotting）为12％，D4S1537基因座为20％。基于上述，在约20％的肝癌中观察到4染色体缺失，但没有观察到SMAD1基因的异常。 2）类似地，使用RT-PCR-SSCP方法分析了SMAD2，SMAD4和TGF-βTyph II受体中的突变，但未观察到异常。 3）在上述肝癌的情况下，分析了参与TGF-β信号传导的分子P15^<ink4b>基因中存在异常。由于PCR分析，未观察到p15^<ink4b>基因缺失的病例。然而，通过甲基化特异性PCR方法分析了p15^<ink4b>基因的甲基化，在44例中有5例中观察到启动子的甲基化。目前，通过蛋白质印迹证实了这些情况下发生率的存在或不存在。