TGF-βシグナル伝達に関わる分子の消化器癌における異常の解析及び癌治療への応用

胃肠癌TGF-β信号相关分子异常分析及其在癌症治疗中的应用

基本信息

批准号：
09770403
负责人：
西田直生志
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770403/
关键词：
肝細胞癌癌抑制遺伝子 Smad1 Smad2 Smad4 TGF-β p15^<INK4B>消化器癌分子生物学

项目摘要

1) ヒト肝細胞癌(肝癌)における第4染色体欠失の意義を検討するため、76症例の肝癌組織及びその非癌部を用い、第4染色体上のSmad1遺伝子の突然変異の有無をRT-PCR-SSCP法にて解析した。Smad1遺伝子(CDNA)のMH2ドメインに3組のPCRPrimerを設定しSSCP法を施行したが、肝癌症例でSmad1遺伝子に異常が認められた例はなかった。次にRNAの得られた36症例の肝癌において、Smad1遺伝子の発現を半定量的PCRを用いて検討した。半定量的PCRはβ-アクチンの発現をコントロールとして用い、26サイクルのPCRを行い判定した。その結果、非癌部に比し癌部で発現量の低下が認められた症例はなかった。一方これらの症例における第4染色体欠失の頻度はFGA座位で27%(PCR-RFLP法)、FABP座位で16%(PCR-RFLP法)、D4S125座位で12%(サザンブロット法)、D4S1537座位で20%であった。上記より肝癌の約2割に第4染色体欠失が認められるが、Smad1遺伝子の異常は認められなかった。2) 同様にSmad2、Smad4、TGF-βタイフIIレセプターの突然変異をRT-PCR-SSCP法にて解析したが、異常の認められた例はなかった。3) 上記の肝癌症例において、TGF-βシグナル伝達に関わる分子であるp15^<INK4B>遺伝子の異常の有無を解析した。PCRを用いて解析した結果p15^<INK4B>遺伝子の欠失が認められた例はなかった。しかしp15^<INK4B>遺伝子でプロモー夕のメチル化を、メチル化特異的PCR法にて解析した結果、44例中5例にプロモーターのメチル化が認められた。現在これらの症例において発現の低下の有無をウエスタンブロット法にて確認している。

1）为了探讨4号染色体缺失在人类肝细胞癌（肝癌）中的意义，我们利用76例肝癌组织及其非癌部位检测4号染色体Smad1基因是否存在突变使用RT-使用PCR-SSCP方法进行分析。在Smad1基因（CDNA）的MH2结构域设置三组PCR引物并进行SSCP方法，但在肝癌病例中未观察到Smad1基因异常。接下来，我们检查了 36 例肝癌病例中 Smad1 基因的表达情况，并使用半定量 PCR 获得了 RNA。以β-actin表达作为对照进行半定量PCR，进行26个循环的PCR。结果，没有发现癌性区域的表达水平低于非癌性区域的情况。另一方面，这些病例中4号染色体缺失的频率在FGA位点（PCR-RFLP法）为27%，在FABP位点（PCR-RFLP法）为16%，在D4S125位点（Southern blotting）为12%。 )，D4S1537 基因座为 12%。由此可见，大约20%的肝癌中观察到4号染色体缺失，但Smad1基因未观察到异常。 2)同样，采用RT-PCR-SSCP方法分析Smad2、Smad4和TGF-β Taifu II受体的突变，但未观察到异常。 3）在上述肝癌病例中，我们分析了参与TGF-β信号转导的分子p15^<INK4B>基因是否存在异常。使用PCR进行分析的结果，没有观察到p15^<INK4B>基因的缺失。然而，当使用甲基化特异性PCR分析p15^<INK4B>基因的启动子甲基化时，在44个案例中的5个中观察到启动子甲基化。目前，这些病例中是否存在表达降低正在通过蛋白质印迹来证实。