平滑筋細胞の機能発達におけるC-kit陽性細胞の制御機構

C-kit阳性细胞对平滑肌细胞功能发育的控制机制

• 批准号: 09770063
• 负责人: 徳富 芳子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770063/
• 关键词: C-kit; 平滑筋細胞; パッチクランプ法; 細胞内Ca^<2+>動態; Ca^<2+>貯蔵部位; ryanadine感受性Ca^<2+>放出; c-kit; ryanodine感受性Ca^<2+>放出

平滑筋細胞の機能発達におけるc-kitレセプター型チロシンキナーゼの役割を明らかにするために,マウス消化管から単離したc-kit陽性細胞及び平滑筋細胞の電気生理学的特性と細胞内Ca^<2+>動態を検討した.同腹の新生マウスを抗c-kitモノクローナル抗体(ACK2)処置群と未処置群(対照群)に分けて検討した.nystatin穿孔バッチクランプ法を用い,膜電位固定下,対照群のc-kit陽性細胞から調律性のCa^<2+>依存性Cl^-電流が観察された.消化管平滑筋細胞からは,自発振動性(STOCs)及びcaffeine惹起(I_<CAF>)のCa^<2+>依存性K^+電流(両者ともBK型)が観察された.これらの電流と,Ca^<2+>高感受性蛍光色素による細胞内Ca^<2+>濃度(|Ca^<2+>|_i)測定を指標として調べた結果,ACK2処置によりc-kit陽性細胞の欠落と自動能障害を起こしている消化管の平滑筋細胞では,細胞内Ca^<2+>貯蔵部位へのCa^<2+>再取り込み機能の低下があることが示唆された.また,STOCs及びI_<CAF>の活性化に動員されるCa^<2+>はryanodine感受性Ca^<2+>放出によって供給されていた.このryanodine感受性Ca^<2+>貯蔵部位へのCa^<2+>の充填には細胞膜に存在する電位依存性Ca^<2+>チャンネルが重要な役割を担っており、自発性電流、caffeine惹起電流及びcaffeine惹起|Ca^<2+>|_i上昇全て、Ca^<2+>チャンネル拮抗薬nicardipineで阻害された.一方,平滑筋収縮においてcaffeineはむしろ抑制的に働き,他の収縮剤によって起こされた収縮を弛緩へ転じさせた.このことは,caffeineで収縮がおこる骨格筋や気道平滑筋とは全く異なっており,消化管平滑筋におけるryanodine受容体の特異性を示すもので,その機能発達に対するc-kitの役割についても今後の検討課題である.

为了阐明C-KIT受体型酪氨酸激酶在平滑肌细胞的功能发展中的作用，我们研究了C-KIT阳性细胞的电生理特性和细胞内CA^<2+>动力学，并从小鼠胃肠道囊中分离出来。带有垃圾的新生儿小鼠被分为治疗和未经处理的抗C-KIT单克隆抗体（ACK2）（对照组）。使用Nystatin穿孔块夹法，Ca^<2+>取决于膜电位固定和对照组的对照组中C-KIT阳性细胞的节奏性。观察到性cl^currents。在胃肠道肌肉细胞中观察到自发振荡（stocs）和咖啡因诱导的（I_ <caf>）Ca^<2+> - 依赖性K^+电流（均为BK型）。我们使用Ca^<2+>高度敏感的荧光染料作为指标研究了这些电流和细胞内Ca^<2+>浓度（| Ca^<2+> | _i）的测量。在胃肠道平滑肌细胞中，这些细胞缺乏C-kit阳性细胞，并具有ACK2治疗的自动功率损伤，在胃肠道平滑肌细胞中细胞内Ca^<2+>在胃肠道平滑肌细胞中经历了C-kit阳性细胞损失，并且是自动功率损害的。有人提出，存储位点的Ca^<2+>重新摄取功能有所下降。此外，Ca^<2+>由ryanodine敏感的Ca^<2+>释放提供为Stocs的激活和I_ <caf>的激活。细胞膜中存在的电压依赖性CA^<2+>通道在储存地点填充Ca^<2+>中起着重要作用，并具有自发电流，咖啡因诱导的电流和咖啡因诱导| C所有a^<2+> | _i的升高受到CA^<2+> | _i的升高。另一方面，咖啡因在平滑肌收缩中的作用更具抑制作用，使其他收缩剂引起的收缩转折。这与在咖啡因中收缩的骨骼和气道平滑肌完全不同，并显示了甲氨蝶呤受体在胃肠道平滑肌肉中的特异性，并且C-KIT在其功能发育中的作用也是将来需要研究的话题。

项目成果

Murakami M.,Tokutomi N.,et al.: "Alkalinizaiton-induced K^+ current of mouse megakaryocyte" Japanese Journal of Pharmacology. in press. (1999)

Murakami M.，Tokutomi N.，et al.：“小鼠巨核细胞碱化诱导的K^电流”日本药理学杂志。

Sugita M.,Tokutomi N.,et al.: "The properties of caffeine-and carbachol-induced intracellular Ca^<2+> release in mouse blader smooth muscle cell." European Journal of Pharmacology. 348. 61-70 (1998)

Sugita M.，Tokutomi N.，et al.：“小鼠叶片平滑肌细胞中咖啡因和卡巴胆碱诱导的细胞内 Ca^2 释放的特性。”

Sugita M., Tokutomi N., et al: "The properties of caffeine- and carbachol-induced intracellular Ca^<2+> release in mouse bladder smooth muscle cells." European Journal of Pharmacology. (in press). (1998)

Sugita M.、Tokutomi N.等人：“小鼠膀胱平滑肌细胞中咖啡因和卡巴胆碱诱导的细胞内 Ca^2 释放的特性。”