神経特異的蛋白失HPC-1の機能調節に関する解析

神经特异性蛋白丢失HPC-1的功能调控分析

基本信息

批准号：
08780747
负责人：
藤原智徳
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780747/
关键词：
開口放出 HPC-1 syntaxin 蛋白質リン酸化

项目摘要

神経細胞間での情報の受け渡しは、開口放出に伴う神経伝達物質の放出により行われていることが知られている。この過程に影響を与える要因の一つとして、Aキナーゼ等を初めとした蛋白質リン酸化酵素の活性化が知られている。これらの酵素は、近年多数同定されてきた開口放出関連蛋白質に対して直接的あるいは間接的に働きかけ、伝達物質の放出過程を調節すると推測される。本研究は開口放出関連蛋白質の中で、形質膜に結合するHPC-1/syntaxin1A蛋白質のリン酸化について検討することを目的として行った。そこで、神経組織においてHPC-1蛋白質のリン酸化が認められるか調べた。そのためHPC-1の他のFamilyとクロスしない特異的な抗体を作成した。これを用いてaffinity colomunを作成し、ラットの脳からHPC-1の精製をおこなった。ここで得られたHPC-1分画を用いて、リン酸化アミノ酸を特異的に認識するモノクローナル抗体によりそのリン酸化の有無を検討した。その結果、HPC-1のSer残基がリン酸化を受けていることが明らかになった(Kushima et al.'97 J.Mol.Neurosci.)。また、PC12h細胞においても、Ser残基のリン酸化が認められた。この蛋白質はカゼインキナーゼ「にリン酸化されるとの報告がある。現在、その他のリン酸化酵素の基質になりうるか調べるために、そのリン酸化部位の同定を試み、そのリン酸化酵素について検討している。また、HPC-1のリン酸化に伴い、SNAP-25、VAMP、synaptotagmine等の結合蛋白質に対する親和性に変化が認められるか検討を行ったが、現在のところ顕著な変化は見いだせていない。今後、培養細胞を用いた免疫沈降によりこの点について明確にしていく予定である。

众所周知，通过与开放释放相关的神经递质的释放，神经细胞之间的信息传递。已知影响该过程的因素之一是激活蛋白质氧化酶，包括激酶等。假定这些酶将直接或间接地与与开放释放有关的开放释放重定位，并调节发射机的释放过程。在这项研究中，这项研究是在开放释放相关蛋白中进行的，以检查与发射膜结合的HPC-1/Syntaxin1a蛋白的磷酸化。因此，检查了是否在神经组织中观察到HPC-1蛋白的磷酸化。因此，我们创建了一种特定的抗体，该抗体不会与其他HPC-1家族交叉。使用它，创建了亲和力colomun，并从大鼠的大脑中纯化了HPC-1。使用此处获得的HPC-1分钟涂料，通过单克隆抗体进行了磷酸化的存在，该抗体专门识别磷酸化的氨基酸。结果，有人发现HPC-1 Ser残基在磷酸化下（Kushima等人97 J.Mol.Neurosci。）。在PC12H细胞中，还观察到Ser残基的磷酸化。据报道，这种蛋白质是磷酸化的，以检查它是否可以是其他磷酸化酶的底物，我们将尝试鉴定磷酸化位点并检查磷酸化酶的变化。 SNAP-25，VAMP和Synaptotagmine带有HPC-1，我们计划通过使用培养细胞进行免疫沉积来阐明这一点。