細胞増殖制御に関わるプロスタグランジンH合成酵素アイソザイムと基質プールの解析

细胞生长控制中涉及的前列腺素 H 合酶同工酶和底物库的分析

基本信息

批准号：
08772124
负责人：
堀隆光
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロスタグランジンは、多種多様な生理作用を持っている生理活性脂質であり、プロスタグランジン生合成系における中心的酵素はプロスタグランジンH合成酵素(PGHS)である。真核細胞においては、2種のPGHSのアイソザイム、PGHS-1とPGHS-2が存在し、両酵素の一次構造のホモロジーは約60%である。両酵素間の最も大きな相違は発現制御の違いであるが、この二つの酵素の生理機能の相違はいまだ明確ではない。プロスタグランジンは細胞増殖に対して、増殖促進・増殖抑制の正負両方向の制御に働きうることが報告されており、本研究では特に、増殖抑制制御における2種のPGHSの寄与およびその基質プールについての解析を行うことを目的とした。ヒト正常繊維芽細胞(FS-4)を上皮増殖因子(EGF)あるいは腫瘍壊死因子(TNF)で刺激すると細胞増殖を促進すると同時にプロスタグランジンの生合成が亢進し、産生されたプロスタグランジンが細胞増殖に抑制的に作用して負の制御因子として機能していることを既に報告している。本研究ではまず両酵素の阻害剤を用いてそれらの効果を検討した。その結果、阻害剤であるインドメタシン、NS-398は10^<-4>Mという高濃度を用いたときにのみ増殖抑制効果を抑えて増殖を強く促進させたため、PGHSとしては2種とも機能している可能性が示された。さらに、2種の酵素の特異的抗体を用いてウエスタンブロッティングを行ったところ、PGHS-2蛋白量には有意な変化が認められずPGHS-1の寄与が大きいことが示唆されたが、用いた抗PGHS-1抗体の反応性が悪くPGHS-1蛋白の変化は検出できなかった。また、アンチセンスDNAやPGHS変異体遺伝子を用いた解析を行っているが現在のところ決定的な結果は得られていない。基質プールの解析と共に今後の課題である。

前列腺素是具有多种生理作用的生理活性脂质，前列腺素生物合成系统的中心酶是前列腺素H合酶(PGHS)。在真核细胞中，存在两种PGHS同工酶，PGHS-1和PGHS-2，两种酶的一级结构同源性约为60%。两种酶最大的区别在于表达调控的差异，但这两种酶的生理功能差异目前尚不清楚。据报道，前列腺素可以从正向和负向控制细胞增殖，促进和抑制增殖。在本研究中，我们重点研究了两种类型的PGHS在控制增殖方面的贡献及其底物库。研究目的是对以下内容进行分析。用表皮生长因子（EGF）或肿瘤坏死因子（TNF）刺激正常人成纤维细胞（FS-4）可促进细胞增殖，同时增加前列腺素生物合成，并且所产生的前列腺素已被报道可抑制细胞增殖并抑制细胞增殖。发挥负调节作用。在这项研究中，我们首先研究了两种酶抑制剂的作用。结果，抑制剂吲哚美辛和NS-398仅在10^-4M的高浓度下使用时抑制生长抑制作用并强烈促进增殖，因此表明它们均具有PGHS功能。是一种可能性此外，当使用两种酶的特异性抗体进行蛋白质印迹时，没有观察到PGHS-2蛋白的量发生显着变化，这表明PGHS-1做出了很大的贡献，因此无法检测到PGHS-1蛋白的变化。抗 PGHS-1 抗体反应性差。我们也在利用反义DNA和PGHS突变基因进行分析，但目前还没有得出结论性的结果。这是与底物池分析一起的未来问题。