心筋の興奮収縮連関におけるCaチャネルとリアノジン受容体の相互作用に関する研究

Ca通道与兰尼碱受体在心肌兴奋-收缩耦合中相互作用的研究

• 批准号: 08772081
• 负责人: 赤羽 悟美
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772081/
• 关键词: 心臓; カルシウムチャネル; リアノジン受容体; カルシウム; 興奮収縮連関; 心筋; 心室筋細胞; 細胞骨格

申請者はまず、L-型Caチャネルとリアノジン受容体の相互作用を、様々な濃度のCaキレート剤(0.2mM Fura-2;2 mM Fura-2;14 mM EGTA plus 2mM Fura-2;10 mM BAPTA)を細胞内に灌流することにより細胞内遊離Caの拡散距離を変えた条件下で(10nm〜>500nm)単離ラットおよびモルモット心室筋細胞を用いてI_<Ca>とCa^<2+>_i-transientを同時測定することにより検討した。その結果、2mM Fura-2または14 mM EGTA plus 2mM Fura-2により細胞内遊離Caの拡散距離を50nm以下に抑えても、L-型Caチャネル刺激により引き起こされる小胞体からのCa^<2+>放出や放出されたCa^<2+>によるL-型CaチャネルのCa^<2+>依存性不活性化のプロセスは疎外されないことを見い出し、L-型Caチャネルとリアノジン受容体は50nm以内の距離で接近して存在することを明らかにした。次に、L-型Caチャネルとリアノジン受容体のcross-signalingへの細胞骨格蛋白系の関与を検討するために、特にSRからのCa^<2+>放出を敏感に反映するL-型CaチャネルのCa^<2+>依存性不活性化に注目し、trypsin、carboxypetidase A、microtubules脱重合促進薬のcolchicine、microtubules重合安定化剤のtaxolの作用を検討した。trypsin、carboxypetidase A、およびtaxolは細胞内灌流により適用した。trypsinおよびcarboxypetidase AはI_<Ca>を増大し不活性加速度を著名に遅らせた。taxolはI_<Ca>の不活性加速度を遅らせる蛍光に加えて、I_<Ca>のrun downを防いだ。colchicine単独の作用は明らかではなかった。現在、。(1)上記の薬物により抑制された不活性化成分がCa^<2+>依存性不活性化であるか、(2)L-型Caチャネルの不活性化とSRからのCa^<2+>放出の関係がどのように変化したか、の2点について検討中である。なお、本実験は奨励研究Aの研究費で購入したデスク型防振台の上に装置を組んで実施した。

申请人首先是L型Ca通道与后NOJIN受体（0.2mm fura-2; 2 mm fura-2; 14 mm Egta加2mm fura-2; 10 mm fura-2; 10 mm fura-2; 10 MM在条件下（10nm〜> 500 nm）分离大鼠和Molmott心室肌肉细胞在Bapta的条件下被调入细胞中，以改变细胞内Ca的扩散距离I_ <ca）和Ca^<2+> 。结果，即使细胞内游离CA的扩散距离降低至50 nm或更少，乘以2mm fura-2或14 mm egta加2mm fura-2，ca^<2+ <2+ <2+>发现Ca^<2+> Ca^<2+> Ca^<2+>诱导L型Ca通道的过程不疏远，L型Ca通道和后Nozine受体是50 nm。在距离内。接下来，为了考虑细胞骨骼蛋白系统在L型Ca通道的交叉信号和后NOJIN受体的交叉信号中，L型Ca特别反映了Ca^<2+>从SR。着眼于通道的CA^<2+>，我们检查了胰蛋白酶，羧甲基二酶A，微管去除和微管聚合稳定剂的作用。胰蛋白酶，羧二酶A和紫杉醇通过细胞内灌注施用。胰蛋白酶和羧基替迪酶A增加了I_ <ca>并延迟了非活动加速度。除了延迟i_ <ca>的惰性加速度的荧光外，紫杉醇可防止I_ <ca>降低。仅秋水仙碱就不清楚。电流，。 （1）上述药物抑制的灭活成分是否为CA^<2+>急性灭活，（2）Ca^<2来自SR +>，我们正在考虑有关释放方式的两点。此外，该实验是在从鼓励研究的研究费用上购买的台式振动表上的设备上实施的。

项目成果

Kurokawa, J., Adachi-Akahane, S., and Nagao, T.: "1,5-Benzo thiaze pine Binding Domain is Located on the Extra-cellular Sice of the Cardiac L-type Ca^<2+> Channel." Molecular Pharmacology. 51. 262-268 (1997)

Kurokawa, J.、Adachi-Akahane, S. 和 Nagao, T.：“1,5-苯并噻嗪松结合域位于心脏 L 型 Ca^<2> 通道的细胞外部分。”

Hagiwara, M., Adachi-Akahane, S., and Nagao, T.: "High Affinity Binding of DTZ323, a Novel Derivative of Diltiazem, to Rabbit Skeletal Muscle L-type Ca^<2+> Channels." Journal of Pharmacology & Experimental Therapeutics. (in press). (1997)

Hagiwara, M.、Adachi-Akahane, S. 和 Nagao, T.：“地尔硫卓的新型衍生物 DTZ323 与兔骨骼肌 L 型 Ca^<2> 通道的高亲和力结合。”

Adachi-Akahane, S., Cleemann, L., & Morad, M.: "Cross-signaling between L-type Ca^<2+> Channels and Ryanodine Receptors in Rat Ventricular Myocytes" Journal of General Physiology. 108. 435-454 (1996)

足立赤羽，S.，克莱曼，L.，