リポ多糖(LPS)によるマウスマクロファージ及び線維芽細胞の活性比に関する研究

脂多糖（LPS）对小鼠巨噬细胞和成纤维细胞活性比值的研究

• 批准号: 08770198
• 负责人: 冨永 薫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770198/
• 关键词: リポ多糖; マクロファージ; MAPキナーゼ; NF-κB

昨年度我々が作製したLPS応答性胎児線維芽細胞株(MEF.He)およびLPS低応答性胎児線維芽細胞株(MEF.HeJ)を、LPSを含む種々の刺激物質で刺激し、IL-6の発現を指標に、両細胞株の応答性を調べた。MEF.He細胞株では、LPSのみならずマウスマクロファージにおいてLPSと同様な作用を示すことが明らかとなっているタキソ-ルや細胞内セカンドメッセンジャーの一つであるセラミドに応答してIL-6mRNAを発現した。一方、MEF.HeJ細胞株では、LPSのみならずこれらの刺激に不応答で、IL-6mRNAを発現しなかった。陽性コントロールのIL-1α刺激では、両細胞株共に応答し、IL-6mRNAを発現した。MEFは、マクロファージに発現し、LPSレセプターの一つであると考えられているCD14分子を発現していないので、CD14を介さないLPSシグナル伝達系の存在が示唆された。また、チロシンキナーゼ阻害剤を用いた実験から、MEF.HeにおけるLPSシグナル伝達系にもチロシンキナーゼが関与することを明らかにし、MEFのLPSシグナル伝達系はマクロファージのそれと共通性が高いことが示唆された。LPSで細胞を前処理すると、2回目のLPS刺激に対して著しく不応答になることが知られており、LPSトレランスとよばれている。マウス腹腔マクロファージを用い、LPSトレランス状態にある細胞のLPSシグナル伝達系を調べた。LPSレランスマクロファージでは、3種のMAPキナーゼ(MAPK,p38,JNK)全ての活性化が抑制されていた。また、MAPKの上流に位置するキナーゼであるRaf-1の活性化も抑制されており、これらMAPキナーゼファミリーの上流のキナーゼがLPSトレランスでは抑制されることを明らかにした。またLPS刺激により活性化される重要な転写因子NF-κBの活性化もLPSトレランスマクロファージでは抑制されていた。以上の結果は、LPSトレランスがLPSシグナル伝達系を構成するかなり上流に位置する分子の抑制により引き起こされることを強く示唆していた。

LPS反应性胎儿成纤维细胞系（MEF.HE）和LPS响应性胎儿成纤维细胞系（MEF.HEJ），该细胞系（MEF.HEJ）通过包括LPS在内的各种兴奋剂进行了刺激，并使用IL-6表达来检查两种细胞系的各种兴奋剂。在MEF.HE细胞系中，对紫杉醇的响应表示IL-6 mRNA，它已显示出与LPS相似的作用，不仅在LPS中，而且在小鼠巨噬细胞中，以及Ceramide，这是第二个细胞内信使之一。另一方面，在MEF.HEJ细胞系中，不仅是LP，而且对这些刺激无反应，也没有表达IL-6 mRNA。阳性对照IL-1α刺激对两个细胞系和表达的IL-6 mRNA做出了反应。 MEF不表达CD14分子，该分子在巨噬细胞上表达，被认为是LPS受体之一，表明存在非CD14介导的LPS信号系统。此外，使用酪氨酸激酶抑制剂的实验表明，MEF中的LPS信号系统也参与了酪氨酸激酶，这表明MEF中的LPS信号系统与巨噬细胞具有很高的通用性。已知用LPS对细胞进行预处理会引起第二LPS刺激的显着无反应性，称为LPS耐受性。使用小鼠腹膜巨噬细胞研究了LPS耐受性中细胞的LPS信号系统。 LPS依靠的巨噬细胞抑制了所有三种MAP激酶（MAPK，P38，JNK）的激活。此外，RAF-1的激活（一种位于MAPK上游的激酶）也受到抑制，并且揭示了这些MAP激酶家族上游的激酶在LPS耐受性中受到抑制。另外，在LPS耐受性巨噬细胞中也抑制了重要转录因子NF-κB的激活NF-κB。以上结果强烈表明LPS公差是由于抑制位于LPS信号系统上游的分子的抑制引起的。