定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法の開発

利用定量靶向蛋白质组学开发快速、简单的血液纳武单抗绝对浓度测量方法

基本信息

批准号：
18H00408
负责人：
阿部一樹
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00408/
关键词：
抗体医薬品 LC-MS/MS プロテオミクス

项目摘要

既存の抗体医薬品分析法では、大量に生成されるペプチド断片によるイオンサプレッションや、抗体医薬品のペプチド消化に長時間かかることが問題となっている。これらの問題によって、LC-MS/MS法を用いた抗体医薬品の臨床応用が困難となっている。そこで本研究では、IgG精製を利用した前処理法によるイオンサプレッションの軽減と、固相化トリプシンを用いた迅速酵素消化による消化時間の短縮を試み、臨床応用可能なLC-MS/MS法によるニボルマブの血中濃度測定法を構築することを目的とした。目的達成のため、まず、質量分析計を用いてニボルマブ特有のペプチド(サロゲートペプチド)の同定、並びにその検出条件を決定した。次に、高速液体クロマトグラフィーを用いてサロゲートペプチドの分離条件を決定した。そして、サロゲートペプチドに対する前処理条件、すなわち、固相抽出条件、ニボルマブの酵素消化条件、血清のIgG精製条件を決定した。固相抽出にはOasis HLBを用いることで、疎水性相互作用を利用したペプチドの抽出が可能であった。ニボルマブの酵素消化にMonoSpin Trypsinを用いることで、20分以内に酵素消化が可能であった。血清のIgG精製にMonoSpin ProGを用いることでイオンサプレッションが軽減し、低濃度域まで測定が可能となった。分析法バリデーションを行った結果、本分析法が妥当と判断できたため、ニボルマブによる治療を受けている患者の血清中ニボルマブ濃度を測定したところ、本分析法が臨床応用可能であることが分かった。本研究では、IgG精製を利用することでイオンサプレッションを軽減させ、固相化トリプシンを用いることで迅速消化を可能とした。また、本測定法が臨床応用可能であることも示された。従って、本研究により定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法が構築された。本測定法は他の抗体医薬品分析にも応用可能と考えられた。

现有的抗体药物分析方法由于产生大量肽片段且消化抗体药物肽需要较长时间，存在离子抑制等问题。这些问题使得LC-MS/MS方法难以应用于临床抗体药物。因此，在本研究中，我们尝试通过使用IgG纯化的预处理方法来减少离子抑制，并通过使用固定化胰蛋白酶的快速酶消化来缩短消化时间。本研究的目的是开发一种测量血液浓度的方法。为了实现这一目标，我们首先使用质谱仪来鉴定nivolumab特有的肽（替代肽）并确定其检测条件。接下来，使用高效液相色谱法确定替代肽的分离条件。然后，确定替代肽的预处理条件，即固相提取条件、纳武单抗酶消化条件和血清IgG纯化条件。通过使用 Oasis HLB 进行固相萃取，可以利用疏水相互作用提取肽。通过使用 MonoSpin 胰蛋白酶对纳武单抗进行酶消化，酶消化可在 20 分钟内完成。通过使用 MonoSpin ProG 进行血清 IgG 纯化，减少了离子抑制，从而可以在低浓度范围内进行测量。分析方法验证的结果，确定该分析方法是合适的，并测定了接受纳武单抗治疗的患者的血清纳武单抗浓度，发现该分析方法可以应用于临床。在本研究中，我们通过使用 IgG 纯化减少离子抑制，并通过使用固定化胰蛋白酶实现快速消化。也表明该测量方法具有临床适用性。因此，本研究构建了一种利用定量靶向蛋白质组学测量纳武单抗绝对血液浓度的快速、简单的方法。人们认为这种测量方法也可以应用于其他抗体药物分析。