定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法の開発

利用定量靶向蛋白质组学开发快速、简单的血液纳武单抗绝对浓度测量方法

基本信息

批准号：
18H00408
负责人：
阿部一樹
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00408/
关键词：
抗体医薬品 LC-MS/MS プロテオミクス

项目摘要

既存の抗体医薬品分析法では、大量に生成されるペプチド断片によるイオンサプレッションや、抗体医薬品のペプチド消化に長時間かかることが問題となっている。これらの問題によって、LC-MS/MS法を用いた抗体医薬品の臨床応用が困難となっている。そこで本研究では、IgG精製を利用した前処理法によるイオンサプレッションの軽減と、固相化トリプシンを用いた迅速酵素消化による消化時間の短縮を試み、臨床応用可能なLC-MS/MS法によるニボルマブの血中濃度測定法を構築することを目的とした。目的達成のため、まず、質量分析計を用いてニボルマブ特有のペプチド(サロゲートペプチド)の同定、並びにその検出条件を決定した。次に、高速液体クロマトグラフィーを用いてサロゲートペプチドの分離条件を決定した。そして、サロゲートペプチドに対する前処理条件、すなわち、固相抽出条件、ニボルマブの酵素消化条件、血清のIgG精製条件を決定した。固相抽出にはOasis HLBを用いることで、疎水性相互作用を利用したペプチドの抽出が可能であった。ニボルマブの酵素消化にMonoSpin Trypsinを用いることで、20分以内に酵素消化が可能であった。血清のIgG精製にMonoSpin ProGを用いることでイオンサプレッションが軽減し、低濃度域まで測定が可能となった。分析法バリデーションを行った結果、本分析法が妥当と判断できたため、ニボルマブによる治療を受けている患者の血清中ニボルマブ濃度を測定したところ、本分析法が臨床応用可能であることが分かった。本研究では、IgG精製を利用することでイオンサプレッションを軽減させ、固相化トリプシンを用いることで迅速消化を可能とした。また、本測定法が臨床応用可能であることも示された。従って、本研究により定量的標的プロテオミクスを用いた迅速かつ簡便な血中ニボルマブ絶対濃度測定法が構築された。本測定法は他の抗体医薬品分析にも応用可能と考えられた。

现有的抗体药物分析方法导致了诸如大量肽片段抑制离子的问题，并长期使用抗体药物来消化肽。这些问题使得使用LC-MS/MS方法在临床上使用抗体药物很难。因此，这项研究旨在通过使用IgG纯化来减少离子抑制，并使用固定的胰蛋白酶快速消化缩短消化时间，并构建一种使用LC-MS/MS方法来测量Nivolumab血液浓度的临床适用方法。为了实现目标，首先，使用质谱仪确定了Nivolumab特异性肽（替代肽）的鉴定（替代肽）和检测条件。然后使用高性能液相色谱法确定替代肽分离的条件。替代肽的预处理条件，即固相萃取条件，Nivolumab的酶消化条件和血清IgG纯化条件。通过使用OASIS HLB进行固相提取，可以使用疏水相互作用提取肽。通过使用Monospin胰蛋白酶，可以在20分钟内进行nivolumab的酶促消化。利用单种蛋白Prog进行血清IgG纯化可减少离子抑制，从而可以测量低浓度范围。由于分析方法验证，确定这种分析方法是合适的，并且测量接受nivolumab治疗的患者的Nivolumab的血清浓度被测量时，发现该分析方法可以临床应用。在这项研究中，使用IgG纯化来减少离子抑制，并且使用固定的胰蛋白酶可以快速消化。还显示该测定法可以在临床上应用。因此，这项研究建立了一种快速便捷的方法，用于使用定量靶蛋白质组学确定绝对血液Nivolumab浓度。该测定法被认为适用于其他抗体药物分析。