「造血の場」としての間葉系幹細胞から検討する血液悪性疾患の発症メカニズム

从间充质干细胞作为“造血场”研究血液系统恶性疾病的发病机制

• 批准号: 16H00656
• 负责人: 杉野 典子
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: 京都大学医学部附属病院輸血細胞治療部
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H00656/
• 关键词: 間葉系幹細胞; 骨髄異形成症候群

(研究目的)骨髄異形成症候群(以下MDS)は難治性の血液悪性疾患で、進行すると白血病に進展する。日本では高齢社会を背景に患者数が増加し、その対策は喫緊の課題である。造血の中心である骨髄には、血球の他に、造血を支持する間葉系幹細胞(以下MSC)が存在する。マウスではMSCの異常がMDSを引き起こすことが報告されており、MDSが骨髄環境の異常による疾患である可能性が示唆されている。本研究は、MDS患者の骨髄MSCの解析によってMDSの発症メカニズムを明らかにすることを目的とした。(研究方法)MDS患者からの骨髄液の入手については京都大学医学部附属病院倫理委員会の承認を得て行った。入手した6例のMDS患者の骨髄液を用いてMSCの分離・培養を試み、4例で分離・培養に成功した。4例の内訳は、低リスクMDS(RCMD)2例、高リスクMDS(RAEB-1, RAEB2)2例であった。MSCの分離・培養については、プラスチックディッシュに接着する細胞を継代する方法(接着法)を用いた。分離したMDS患者由来のMSC(以下MDS-MSC)と健常ドナーのMSC(以下HD-MSC)を用いて、1、CD34陽性造血幹前駆細胞(以下HSPC)との共培養実験及びフローサイトメトリー解析、2、MSCの分化誘導実験、3、マイクロアレイ法を用いた網羅的遺伝子発現解析を行った。(研究成果)1、HSPCとの共培養実験で、高リスクMDS由来のMDS-MSCと共培養した際にHSPCの増殖が有意に促進されることを確認した。2、MSCの分化誘導実験では、低リスクMDS由来のMDS-MSCでは脂肪への分化能が低下していたが、高リスクMDS由来のMDS-MSCでは上昇していた。3、遺伝子発現解析の結果、HD-MSCとMDS-HSCで有意な発現の傾向の差があり、また高リスクMDS由来と低リスクMDS由来のMDS-MSCでも差があることを見出した。現在、発現に差のある個々の遺伝子についてさらに解析を進めている。今後はさらに検体数を増やしてこれらの傾向の再現性を検討するとともに、遺伝子発現解析で変化を同定した遺伝子についてsiRNAを用いてMDS-MSCの性質が変化するかを検討する。

（研究目的）骨髓状综合征（MDS）是一种棘手的血液恶性疾病。在日本，在衰老社会的背景下，患者数量有所增加，措施是紧迫的问题。除了血细胞外，造血骨髓的骨髓具有支持造血剂的叶状干细胞（以下简称MSC）。小鼠报告说，MSC异常会导致MD，这表明MDS可能是由于异常骨髓环境而成为一种疾病。这项研究是通过分析MDS患者的骨髓MSC来阐明MDS在MDS发作的机制。 （研究方法）京都大学医院伦理委员会批准了MDS患者的骨髓液。我们试图使用6例MDS患者的6例分离和培养MSC，并在四例中成功进行分离和培养。这四个病例的分解是2例低风险MDS（RCMD）和两个高风险MDS（RAEB-1，RAEB2）。对于MSC的分离和培养，使用了一种接管粘附在塑料盘的细胞（粘合剂方法）的方法。衍生自分离的MDS患者和MSC（HD-MSC）的MSC（MDS-MSC），一个健康的供体（以下简称HD-MSC），1，CD34阳性造血型造血躯干前体细胞（HSPC）和欺诈性的度量分析，2 。 （研究结果）1。在与HSPC共同培养实验中，证实HSPC的增殖是通过高风险MDS衍生的MDS-MSC培养的。 2。在MSC分化诱导实验中，低风险MDS衍生的MDS-MSC降低了脂肪分化，但在高危MDS衍生的MDS-MSC中上升。 3。由于基因表达分析，我们发现HD-MSC和MDS-HSC之间的显着趋势与源自高风险MDS和低风险MDS的MDS-MSC之间存在差异。目前，我们正在进一步分析具有表达差异的个体基因。将来，标本的数量将进一步增加以检查这些趋势，MDS-MSC的性质将使用siRNA来改变通过遗传表达分析鉴定出变化的基因。