シャペロニンGroE存在下でのフォールディング反応条件を規定する分子機構の解明

阐明伴侣蛋白 GroE 存在下调节折叠反应条件的分子机制

基本信息

批准号：
12780497
负责人：
溝端知宏
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの実験において,GrbELのアピカルドメインにトリプトファン残基を導入したGroELR231W変異体がATPや補助蛋白質のGroES存在下で構造変化を反映する多数の蛍光強度変化を示すことを解明した。本年度ではこの結果を受けGroELR231W変異体を用いて観測することができた構造変化がGroELの機能的性質から提唱されているサイクル反応機構とどのような関連性を持つのかを詳細に解析するため,GroELの機能に何らかの影響を及ぼす「機能障害」型の変異体をGroELR231W変異体にさらに導入し,この機能障害によりR231W由来の蛍光強度変化がどのように影響されるのかを詳細に解析する実験を行った。数種類の機能障害変異体とGroELR231W変異体との2重変異体を作成し,基礎的性格付けを行った結果,GroELC138W変異体との組み合わせにおいて興味深い結果を得ることができた。GroELC138W変異はGroELに温度依存的性質をもたらす変異で,この変異体は37℃では全く野生型と変わらない性質を持つが25℃では結合した基質蛋臼質分子を再び溶液に放出する直前の段階で反応が停止する性質を示す。この変異体とR231W変異体を組み合わせた2重変異体は温度に依存してトリプトファン由来の蛍光変化が大きく異なることを解明した。このことよりさらに,GroELの反応機構において標的蛋白質を溶液中に放出するという大変重要なステップに関与している構造変化を同定することに成功した。,

在实验到上一年之前，阐明了GROELR231W突变体在GRBEL的顶端域中引入了色氨酸残基，显示出大量的荧光强度变化，这些变化反映了在ATP和辅助蛋白的存在下的结构变化。在这个财政年度，为了详细分析如何使用GROELR231W突变体根据此结果观察到的结构变化，以详细分析了基于GROEL的功能性质提出的循环反应机制。 “突变体会对凹槽对GroELR231W突变体的功能产生一定的影响，并分析该功能障碍如何受R231W衍生的荧光强度的影响。创建了几种类型的功能障碍和GROELR231W突变体的双重功能，并进行了基本个性，从而与GROELC138W突变体结合使用了有趣的结果。 GROELC138W突变是一种突变，它将温度依赖性的特性带到凹槽中，并且该突变体在37°C时具有与野生型相同的特性，但在25°C下具有相同的特性。它显示了反应停止的特性。。可以阐明的是，将该变量和R231W突变体结合在一起的双注度大胆取决于温度和来自色氨酸的荧光变化差异很大。此外，我们成功地确定了将靶蛋白释放到凹槽反应机理中溶液中非常重要的步骤中涉及的结构变化。 ,,,,