リン酸化反応、レドクスによるインターロイキン1レセプターの発現制御

通过磷酸化和氧化还原反应调节 IL-1 受体表达

基本信息

批准号：
10771300
负责人：
瀧井猛将
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、リン酸化反応、レッドクスによるIL-1RI発現調節機構を明らかにし、IL-1の作用調節の可能性を探るものである。そこで、本研究ではチロシンキナーゼの特異的な阻害剤、還元剤、抗酸化剤を用いて検討した。ヒト線維芽細胞株TIG-1にチロシンキナーゼの阻害剤であるゲニステインやチロホスチンで処理すると、^<125>I標識したIL-1の結合をゲニステインは用量依存的、また、経時的にも抑制した。スキャッチャードプロット解析の結果、ゲニステインはIL-1RIの親和性を変えることなく、細胞表面上のレセプター分子を減少させていたことから、恒常的なIL-1RIの発現にはチロシンキナーゼが関与していることが、本研究で初めて明らかとなった。しかし、ゲニステインはIL-1RI mRNAの発現を抑制しなっかったことから、ゲニステインは転写後の調節に働いていることが示唆された。更に、蛋白合成阻害剤であるサイクロへキシミド存在下でもゲニステインの作用が認められたことから、ゲニステインは翻訳過程以後に作用していることが示唆された。次にIL-1RIの減少がIL-1のシグナルの抑制につながるか、ゲニステイン前処理により、細胞表面上のIL-1RI分子を減少させておき、培地交換でゲニステインを取り除いたあと、IL-1刺激によりIL-1RIに会合するセリシスレオニンキナーゼであるIRAKの活性、IL-1誘導インターロイキン6(IL-6)の産生を検討した。何れの活性もゲニステイン前処理によって抑制されていた。これらのことから、IL-1RIの発現を調節することで、IL-1の作用を調節することができることが示された。一方、2-ME、DTT、NAC等の還元剤、抗酸化剤をTIG-1細胞に作用させると、IL-1RI mRNAの発現を抑制した。このことからIL-1RIの発現はmRNAレベルにおいてレッドクスによる制御を受けていることが明らかとなった。

本研究的目的是阐明磷酸化和氧化还原调节IL-1RI表达的机制，探讨调节IL-1作用的可能性。因此，在这项研究中，我们研究了使用特定的酪氨酸激酶抑制剂、还原剂和抗氧化剂。当用酪氨酸激酶抑制剂金雀异黄素和酪氨酸磷酸蛋白处理人成纤维细胞系TIG-1时，金雀异黄素以剂量依赖性方式随时间抑制125 I标记的IL-1的结合。 Scatchard图分析结果表明，金雀异黄素减少了细胞表面的受体分子，但不改变IL-1RI的亲和力，这表明酪氨酸激酶参与了IL-1RI的组成型表达。然而，金雀异黄素并不抑制 IL-1RI mRNA 表达，表明金雀异黄素在转录后调节中发挥作用。此外，即使在蛋白质合成抑制剂放线菌酮存在的情况下，也观察到金雀异黄酮的作用，这表明金雀异黄酮在翻译过程后起作用。接下来，为了确定IL-1RI的减少是否导致IL-1信号的抑制，通过用金雀异黄素预处理来减少细胞表面的IL-1RI分子，并在通过培养基交换去除金雀异黄素后，IL-1我们研究了IRAK（一种在刺激后与 IL-1RI 相关的裂解狮子氨酸激酶）的活性以及 IL-1 诱导的白细胞介素 6 (IL-6) 的产生。这两种活性均被金雀异黄素预处理所抑制。这些结果表明IL-1的作用可以通过调节IL-1RI的表达来调节。另一方面，当将还原剂和抗氧化剂如2-ME、DTT和NAC应用于TIG-1细胞时，IL-1RI mRNA的表达受到抑制。这些结果表明IL-1RI的表达在mRNA水平上受到氧化还原的调节。