リン酸化反応、レドクスによるインターロイキン1レセプターの発現制御

通过磷酸化和氧化还原反应调节 IL-1 受体表达

基本信息

批准号：
10771300
负责人：
瀧井猛将
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、リン酸化反応、レッドクスによるIL-1RI発現調節機構を明らかにし、IL-1の作用調節の可能性を探るものである。そこで、本研究ではチロシンキナーゼの特異的な阻害剤、還元剤、抗酸化剤を用いて検討した。ヒト線維芽細胞株TIG-1にチロシンキナーゼの阻害剤であるゲニステインやチロホスチンで処理すると、^<125>I標識したIL-1の結合をゲニステインは用量依存的、また、経時的にも抑制した。スキャッチャードプロット解析の結果、ゲニステインはIL-1RIの親和性を変えることなく、細胞表面上のレセプター分子を減少させていたことから、恒常的なIL-1RIの発現にはチロシンキナーゼが関与していることが、本研究で初めて明らかとなった。しかし、ゲニステインはIL-1RI mRNAの発現を抑制しなっかったことから、ゲニステインは転写後の調節に働いていることが示唆された。更に、蛋白合成阻害剤であるサイクロへキシミド存在下でもゲニステインの作用が認められたことから、ゲニステインは翻訳過程以後に作用していることが示唆された。次にIL-1RIの減少がIL-1のシグナルの抑制につながるか、ゲニステイン前処理により、細胞表面上のIL-1RI分子を減少させておき、培地交換でゲニステインを取り除いたあと、IL-1刺激によりIL-1RIに会合するセリシスレオニンキナーゼであるIRAKの活性、IL-1誘導インターロイキン6(IL-6)の産生を検討した。何れの活性もゲニステイン前処理によって抑制されていた。これらのことから、IL-1RIの発現を調節することで、IL-1の作用を調節することができることが示された。一方、2-ME、DTT、NAC等の還元剤、抗酸化剤をTIG-1細胞に作用させると、IL-1RI mRNAの発現を抑制した。このことからIL-1RIの発現はmRNAレベルにおいてレッドクスによる制御を受けていることが明らかとなった。

这项研究的目的是通过磷酸化反应和REDX阐明IL-1RI表达调控的机制，并探索控制IL-1作用的可能性。因此，这项研究是使用酪氨酸激酶的特定抑制剂，还原剂和抗氧化剂进行的。当人成纤维细胞系TIG-1用染料木黄酮或牛脂蛋白治疗时，酪氨酸激酶的抑制剂时，染料木黄酮抑制了 ^<125> i-i-i标记的IL-1的结合，并随着时间的流逝而抑制。 SCATCHARD图分析表明，染料木黄酮在细胞表面降低了受体分子而不改变IL-1RI的亲和力，因此这项研究首次揭示了酪氨酸激酶参与本构型IL-1RI的表达。然而，染料木黄酮没有抑制IL-1RI mRNA的表达，这表明染料木黄酮作用于转录后调节。此外，在蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺的存在下，染料木黄酮的作用也被观察到，这表明染料木黄酮在翻译过程后起作用。接下来，IL-1RI的降低会导致IL-1信号抑制IL-1信号，或通过染料木黄酮预处理减少细胞表面上的IL-1RI分子，并通过培养基交换去除染料木黄酮后，IRAK的活性，IRAK的活性，一种与IL-1刺激的IL-1RI相关的SericysRoynine激酶，以及IL-1刺激的生产，以及IL-1的生产。两种活性都被染料木黄酮预处理抑制了。这些结果表明，通过调节IL-1RI表达，可以调节IL-1的作用。另一方面，当将2-ME，DTT，NAC和抗氧化剂等还原剂应用于Tig-1细胞时，抑制了IL-1RI mRNA的表达。这表明IL-1RI表达在mRNA水平上由REDX控制。