ネフローゼマウスへの低タンパク飼料給餌による血中アルブミンの尿中濾出機序の解析

肾病小鼠低蛋白饮食对血白蛋白尿滤过机制分析

基本信息

批准号：
09780777
负责人：
岡本宗裕
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ICGNマウスは、ネフローゼ症候群を自然発症するマウスで、生後数日からアルブミンを中心とした低分子タンパクが尿中に大量に濾出され、その後日齢にともなって進行性に病態が悪化する。ところが、離乳直後のICGNマウスに6%タンパクという極端にタンパク質を制限した飼料を与えると、2〜3日以内に尿中アルブミンが完全に消失することが最近明らかになった。そこで、低タンパク飼料給餌の前後におけるICGNマウスの病態の変化を分子遺伝学的に検討し、血中アルブミンの尿中ヘの漏出機序を明らかにすることを目的として、研究を実施している。ICGNマウスと正常マウスにおける各種遺伝子の発現パターンを比較したところ、基底膜構成成分であるコラーゲンIVとラミニン、これらの産生を制御するサイトカインであるTGF-βとPDGFの各遺伝子の発現量は、正常マウスにくらべICGNマウスにおいて1.5〜3倍程度高かった。さらに、DDA(differcntial display analysis)法により、ICGNマウスと正常マウスとのあいだで発現量に変化の見られるその他の遺伝子を検索した。DDA法は、非特異的なプライマーを用いたRT-PCRによりmRNAの発現の違いを1枚のゲルの上でフィンガープリントとしていく方法で、同時に多数の遺伝子の発現を解析できる手法である。その結果、フィンガープリント上では両マウス間で特有のバンドが認められたが、現在のところそれらの遺伝子の同定には至っていない。また、ICGNマウスに低タンパク飼料を与えた後経時的に採尿し、尿中アルブミンの消失時期を調べた。尿中アルブミンの消失前後で、糸球体基底膜構成成分の合成と分解に関わる因子の発現がどのように変化したかを調べため、両時期のマウスより腎を摘出し、マイクロダイセクション法により腎糸球体を単離し、mRNAを抽出した。基底膜構成成分であるコラーゲンIV、ラミニン、フィブロネクチン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、その分解に関わるMMPとTIMP、TGF-βやPDGF等のサイトカインについて、現在RT-PCRによりその発現量の変化を調べている。

ICGN小鼠是自发出现肾病综合征的小鼠，其出生后几天内从尿液中滤出大量低分子量蛋白质，主要是白蛋白，并且病情随着年龄的增长而逐渐恶化。然而，最近发现，当ICGN小鼠断奶后立即喂食6%蛋白质的极度限制蛋白质饮食时，尿白蛋白在2至3天内完全消失。因此，我们正在进行研究，目的是通过分子遗传学检查ICGN小鼠在喂食低蛋白饮食前后的病理变化，并阐明血白蛋白渗漏到尿液中的机制。比较 ICGN 小鼠和正常小鼠中各种基因的表达模式，我们发现基底膜成分胶原蛋白 IV 和层粘连蛋白以及控制其产生的细胞因子 TGF-β 和 PDGF 的表达水平ICGN 小鼠的值比小鼠高约 1.5 至 3 倍。此外，我们使用DDA（差异显示分析）方法寻找ICGN小鼠和正常小鼠之间表达水平发生变化的其他基因。 DDA法是利用非特异性引物的RT-PCR，在单张凝胶上检测mRNA表达差异作为指纹，是一种可以同时分析多个基因表达的方法。结果，在两只小鼠的指纹上观察到了独特的条带，但所涉及的基因尚未确定。此外，在给 ICGN 小鼠喂食低蛋白饮食后，随着时间的推移收集尿液以确定尿白蛋白何时消失。为了研究尿白蛋白消失前后参与肾小球基底膜成分合成和降解的因子的表达如何变化，两次从小鼠中取出肾脏，并使用显微解剖分离肾小球并检查mRNA。被提取。我们目前正在使用 RT-PCR 研究基底膜成分 IV 型胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白、硫酸乙酰肝素蛋白多糖、参与其降解的 MMP 和 TIMP，以及 TGF-β 和 PDGF 等细胞因子表达水平的变化。