化学シナプスの情報単位の一つである神経分泌顆粒形成とその制御メカニズムの解明

阐明化学突触信息单位之一的神经分泌颗粒的形成及其控制机制

基本信息

批准号：
09780667
负责人：
大橋正人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は以前、哺乳類のホスファチジルイノシトール(PI)移送蛋白質(PI-TP)が、トランスゴルジネットワーク(TGN)からの神経分泌顆粒形成を促進する細胞質因子であることを見いだし、さらに、TGNからの神経分泌顆粒形成におけるPI-TPと共同して働く脂質膜上因子としてのPIの本質的な関与と、細胞質側因子としてのアクチン系の潜在的な関与を示唆した。今年度は第一に、このPI系の機能発動における一連のカスケードに作用する可能性のある細胞質側因子として、神経分泌顆粒形成を制御することが知られている三量体型Gタンパク質の関与を以前に確立したPC12細胞に由来する無細胞アッセイ系を用いて検討した。細菌由来のmonoPI特異的ホスホリパーゼC(PI-PLC)と、三量体型Gタンパク質に作用することでこの系を制御することの知られているguanosine 5'-3-0-(thio)triphosphate(GTPγS)は、相乗作用的に神経分泌顆粒形成を阻害した。しかし、PI-PLCがアクチン骨格系とTGNの相互作用を亢進するのに対し、GTPγSによる阻害の場合にはこの相互作用の亢進が見られなかった。これらの結果よりGTPγSによる阻害的な制御点はPIの関与する制御点と同じ一連の過程上にあるが、明らかに異なった点であることが示された。第二に、分泌小胞形成における被覆誘導や脂質誘導の実態を明らかにするため、脂質因子群や、クラスリン被覆を誘導する活性を持つマンノース6リン酸受容体に注目した。この受容体の細胞内分布に異常のある培養細胞株を得るため、我々が単離しつつあるTGN-エンドソーム-リソゾーム系に異常を持つ可能性のある変異細胞群を検索した。その結果、2クラスの変異細胞株を得ることができた。これらの細胞株は、TGNからの小胞形成を解析うるために有用なツールとなることが期待できる。

我们之前发现哺乳动物磷脂酰肌醇（PI）转运蛋白（PI-TP）是一种细胞质因子，可促进跨高尔基体网络（TGN）形成神经分泌颗粒，并进一步证明我们认为PI作为脂质膜的重要参与与 PI-TP 一起参与颗粒形成的因子，以及肌动蛋白系统作为细胞质因子的潜在参与。今年，我们将首先关注三聚体 G 蛋白的参与，众所周知，三聚体 G 蛋白控制神经分泌颗粒的形成，作为细胞质因子，可能作用于激活 PI 系统功能的一系列级联。先前建立的源自 PC12 细胞的无细胞测定系统。细菌单PI特异性磷脂酶C（PI-PLC）和鸟苷5'-3-0-（硫代）三磷酸（GTPγS）已知通过作用于三聚体G蛋白来调节该系统）协同抑制神经分泌颗粒的形成。然而，虽然 PI-PLC 增强了肌动蛋白骨架和 TGN 之间的相互作用，但当被 GTPγS 抑制时，这种相互作用并未增强。这些结果表明，GTPγS的抑制控制点与涉及PI的控制点位于同一系列过程上，但显然是不同的点。其次，为了阐明分泌囊泡形成中涂层诱导和脂质诱导的实际状态，我们重点关注脂质因子和具有诱导网格蛋白涂层活性的6-磷酸甘露糖受体。为了获得该受体细胞内分布异常的培养细胞系，我们寻找了目前正在分离的一组可能在TGN-内体-溶酶体系统中存在异常的突变细胞。结果，我们能够获得两类突变细胞系。这些细胞系有望成为分析 TGN 囊泡形成的有用工具。