ショウジョウバエの新規細胞周期因子の解析

果蝇新细胞周期因子的分析

基本信息

批准号：
09780651
负责人：
杉山伸
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

MAPKKとの遺伝的相互作用を示し、染色体の分配異常表現型の突然変異Gp99を同定した。Gp99遺伝子が新規蛋白質をコードするため、MAPKシグナル伝達系及び細胞周期制御系における作用機構は不明であり、本研究では表現型解析、遺伝子産物の細胞内動態解析、相互作用因子の同定によって作用機構を解明することを目的にしている。1) 遺伝子導入による表現型回復実験:Gp99は転写開始点附近にトランスポゾンが挿入された遺伝子として同定されたが、すぐ上流に別の遺伝子が見つかり、多重突然変異である可能性が否定できずにいた。しかし、Gp99のみを含むゲノム断片を導入したところ表現型の完全回復が見られ、原因遺伝子である確証が得られると共に、剛毛矯小化などの表現型もGp99に依存していることが判った。2) 過剰発現実験: Gp99を成虫複眼で過剰発現させたところ、個眼配列に乱れが生じ、細胞分裂制御に影響したと期待され、複眼の正常な発生にはGp99の発現の正しい制御が必要だと判明した。今後は解析を組織レベルで進めると共にこの新規表現型を抑圧もしくは増強する突然変異を検索し、相互作用因子を同定する。3) 標識アミノ酸配列を付加した融合蛋白の発現によるGp99遺伝子産物のの解析:HA標識配列を付加したGp99遺伝子を導入し、GAL4/UAS系で発現させたところ、正しい分子量の蛋白質がショウジョウバエから特異的に検出された。標識蛋白質の細胞内局在や細胞周期を通じた動態に関してはまだ結論に到っておらず、免疫沈降実験による結合因子の検索と併せて解析を続ける予定である。

它显示出与MAPKK的遗传相互作用，并被鉴定出异常的染色体分布。由于GP99基因编码了新蛋白质，因此MAPK信号传输系统和细胞周期控制系统中的动作机制尚不清楚，在这项研究中，通过分析表达类型，遗传产物的细胞内动态分析以及鉴定相互作用的动作机制。因素。 1）通过遗传引入的表达恢复实验：GP99被鉴定为在转移起点附近插入的基因，但是在上游发现了另一个基因，并且无法否认多重突变的可能性。然而，引入仅包含gp99的基因组片段，可以看到表达类型的完全恢复，并确认它是一种致命基因，发现诸如刚性衰减之类的表达类型也取决于在GP99上。 2）过度的现实实验：预计具有成年复合眼的GP99会干扰单个眼睛的排列并影响细胞分裂的控制，并且复合眼的正常出现需要正确控制GP99的表达。将来，分析将在组织水平上促进，并将搜索一个突变，以抑制或增强这种新的表达类型，并确定相互作用因子。 3）通过在GAL4/UAS系统中引入并表达了含有符号的氨基酸序列的融合蛋白的GP99基因产物：正确的分子量蛋白是独一无二的。它尚未得出结论标记蛋白质的内部类别和整个细胞周期的动力学，并将继续通过免疫实验来搜索结合因子。