大腸菌由来7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の動的X線結晶構造解析

大肠杆菌7α-羟基类固醇脱氢酶的动态X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
09780600
负责人：
野中孝昌
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ケージ化グリコケノデオキシコール酸(caged GCDCA)の溶液に7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の結晶を一昼夜浸した後、取り出してキャピラリーに封入し、高エネルギー加速器研究機構所放射光研究施設のビームライン18Bにおいて光を当てない状態でラウエ回折強度データを収集した。1フレームにつき20ミリ秒の露出とし、10ﾟ(スピンドル軸の角度)間隔で合計6フレームの撮影を行った。キャピラリーをゴニオメータヘッドに取り付けたまま、照明を点灯し、1時間後に再度、同じ条件でラウエ回折強度データを収集した。反応の前後の2つのデーターセットに対し、結晶構造解析を行い、酵素反応の前後での構造の比較を行った。400×800mm^2の大型イメージングプレートを用いて収集したラウエ回折強度データは、プログラムLAUEGENを用いて処理を行った。積分強度の波長に対する規格化を行った後、すべてのフレームのデータをマージして一つのデータセットとした。プログラムREFMACを用いて酵素反応の前後の立体構造の精密化を行い、両者の比較を行った。両者とも差フーリエ図上にグリコケノデオキシコール酸、あるいはその反応産物に対応する電子密度分布を観測することはできなかった。そもそも、ケージ化グリコケノデオキシコール酸が7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の結晶に導入されていなかった可能性がある。

在笼糖糖二毒性毒性溶液中，7α-羟系统脱氢酶晶体（Cage GCDCA），然后将其取出并将其封闭在毛细管中，并在光束线18B中的光线辐射光学研究设施中光，加速器研究组织是在没有应用的情况下收集的。每架20毫米秒的暴露量总共拍摄了6帧，总共以10°（纺锤体轴角）拍摄了6帧。将毛细管连接到GONIMOMETER头部，打开照明，一个小时后，在相同的条件下收集了LAUE折叠强度数据。对反应前后的两个数据集进行了晶体结构分析，并在酶反应前后比较结构。使用程序Lauegen处理的LAUE - 时间折叠强度数据使用400 x 800mm^2的大型成像板进行了处理。在标准化集成积分波长之后，将所有帧数据合并以制作一个数据集。使用程序REFMAC，在酶反应之前和之后进行了三维结构，并比较了两种结构。在这两种情况下，都无法观察到糖二毒性毒性酸或与反应产物相对应的FURIE图差的电子密度分布。首先，可能未在7α-Hydroque Systeme脱氢酶的晶体中引入笼糖二羟基胆酸。