大腸癌に対するがん免疫療法における革新的治療予測バイオマーカーの探索

寻找结直肠癌癌症免疫治疗中的创新治疗预测生物标志物

基本信息

批准号：
22K16491
负责人：
清住雄希
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸癌における治療効果バイオマーカー探索のため、まず大腸癌症例979例の臨床病理学的因子を調査した。StageIV症例198例を含む手術療法、化学療法症例の予後を解析し、免疫染色を行うためのサンプルづくりを実施した。本研究において解析する因子についてもこの時点で整理した。まず、免疫学的背景を分類するため、以前の研究より当科で行っているCD3、CD4、CD8、FOXP3の免疫染色を行い、ハイブリッドセルカウンター、BZ-Xを用いて陽性リンパ球数のカウントを行った。こちらは腫瘍先進部３視野のリンパ球数の平均値を算出する方法で、データごとの差異が最小限にとどまるよう工夫し、これまでも同様の手法を用いて報告している。腫瘍浸潤リンパ球数と予後の関連性を解析すると、CD3、CD8、FOXP3低発現群で有意に予後が不良であるという結果が得られ、一方でCD4陽性リンパ球においては有意差を認めなかった。これらの解析と並行して、大腸癌肝転移症例181例を抽出しており、現在DNA抽出、real-time PCR、免疫染色などの実験準備を進めている。次に、本研究の中核的解析であるMSI-H症例の探索を行った。大腸癌組織の凍結標本よりDNAを抽出し、ベセスダ分類に則ってBAT25、BAT26というMSIのマーカーを用いたPCRを行い、DNAシークエンサーで解析を実施した。Microsatelliteの反復回数に変化がある症例をMSI症例、変化がない症例をMSS症例とし、256例の解析を行った。256例中、MSI-Hの結果を得たものは30例（11.7％）であり、過去の報告に合致する結果が得られた。現在、本研究結果に基づき、MSI-H群 vs MSS群に分類し、臨床病理学的特徴の解析、前述の腫瘍浸潤リンパ球数との関連性について解析を進めている。

为了寻找结直肠癌治疗效果的生物标志物，我们首先调查了 979 例结直肠癌病例的临床病理因素。我们分析了手术和化疗病例的预后，包括 198 例 IV 期病例，并制备了免疫染色样本。本研究分析的因素也是在此时整理的。首先，为了对免疫背景进行分类，我们对自前期研究以来一直在本科进行的CD3、CD4、CD8和FOXP3进行了免疫染色，并使用混合细胞计数器BZ-X对阳性淋巴细胞进行了计数。。我做到了。该方法计算晚期肿瘤部位三个视野中淋巴细胞数量的平均值，并旨在最小化数据之间的差异，并且过去已使用相同的方法进行了报道。分析肿瘤浸润淋巴细胞数量与预后的关系发现，CD3、CD8、FOXP3低表达组的预后明显较差，而CD4阳性淋巴细胞则无明显差异。与这些分析并行，我们还提取了181例结直肠癌肝转移病例，目前正在准备DNA提取、实时PCR和免疫染色等实验。接下来我们对MSI-H病例进行检索，这是本研究的核心分析。从结直肠癌组织的冷冻标本中提取DNA，根据Bethesda分类使用MSI标记BAT25和BAT26进行PCR，并使用DNA测序仪进行分析。将微卫星重复数发生变化的病例定义为MSI病例，将没有变化的病例定义为MSS病例，对256例进行了分析。在256例病例中，有30例（11.7%）获得MSI-H结果，这与之前的报道一致。目前，根据本研究结果，我们将患者分为MSI-H组和MSS组，并正在进行临床病理特征以及与上述肿瘤浸润淋巴细胞数量的关系分析。