消化管癌の悪性度の上昇におけるKLKの役割の解明

阐明KLK在增加胃肠道癌症恶性程度中的作用

• 批准号: 22K15988
• 负责人: 佐久間 信行
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15988/
• 关键词: プロテアーゼ; 癌関連線維芽細胞; 消化管癌

消化管癌は治療法が開発されつつあるが依然として死因順位が高い。悪性腫瘍の特徴である浸潤・転移は予後に影響し、阻止することで予後改善が望める可能性がある。そのため、浸潤・転移を含む癌悪性度の上昇の機序の解明が求められる。近年、癌周囲の間質組織とがんの悪性度の上昇との関連が注目され、間質には線維芽細胞が存在し、癌との相互作用が疑われている。本研究では、胃癌や大腸癌で発現上昇すると予後不良になることが示唆されているKallikrein-related peptidase (KLK)に注目した。消化管癌においてKLKの発現異常による影響は詳細に解明されておらず、KLKが発現上昇することによる悪性度上昇との関連やKLKによる癌周囲の線維芽細胞への影響を調べることにした。KLKが発現していない胃癌や大腸癌由来細胞株を選び、KLKを安定発現させた細胞株を作成した。細胞株でマトリゲルインベージョンチャンバーを用いて、細胞浸潤能の変化を解析したところ、KLKが発現上昇することで浸潤能の促進が示唆された。また、軟寒天培地中で培養し、Anoikis抵抗性の評価のため足場非依存性増殖能解析を行ったところ、KLKが発現上昇することで足場非依存性増殖能の促進が示唆され、KLKの発現上昇は浸潤・転移などがんの悪性度の上昇させることが考えられた。KLKによる癌周囲の線維芽細胞への影響を調べるため、トランスウェルインサートを用いてKLKを安定発現させたがん細胞と胎児肺由来の正常線維芽細胞で共培養実験を行い、共培養後の線維芽細胞からRNAを抽出し、qPCRで遺伝子の発現解析を行っている。

尽管胃肠癌的治疗方法正在开发中，但它仍然是一个高死因。侵袭和转移是恶性肿瘤的特征，影响预后，通过预防，有可能改善预后。因此，有必要阐明癌症恶性程度增加的机制，包括侵袭和转移。近年来，人们的注意力集中在癌症周围的间质组织与癌症恶性程度增加之间的关系，并且间质中存在成纤维细胞，并且怀疑它们与癌症的相互作用。在这项研究中，我们重点关注激肽释放酶相关肽酶（KLK），有人认为当其在胃癌和结直肠癌中表达升高时，预后较差。 KLK表达异常对胃肠道癌症的影响尚未详细阐明，因此我们决定研究KLK表达增加与恶性肿瘤增加之间的关系以及KLK对癌症周围成纤维细胞的影响。我们选择了不表达KLK的源自胃癌或结肠癌的细胞系，并创建了稳定表达KLK的细胞系。当使用 Matrigel 侵袭室分析细胞系细胞侵袭能力的变化时，表明 KLK 表达增加可促进侵袭能力。此外，当在软琼脂培养基中培养并分析不依赖贴壁的生长能力以评估失巢凋亡抗性时，KLK表达的增加表明不依赖贴壁的生长能力的增加被认为会增加癌症的恶性程度，例如侵袭和转移。 。为了研究 KLK 对癌症周围成纤维细胞的影响，我们使用 Transwell 插入物与稳定表达 KLK 的癌细胞进行共培养实验，并从成纤维细胞中提取 RNA，并使用 qPCR 分析基因表达。