エキシマー蛍光による高選択的キラルアミノ酸分析法構築と統合失調症の早期診断法開発

准分子荧光高选择性手性氨基酸分析方法的构建及精神分裂症早期诊断方法的开发

• 批准号: 22K15269
• 负责人: 古賀 鈴依子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15269/
• 关键词: キラルアミノ酸; 光学分割; エキシマー蛍光; 蛍光誘導体化; 多次元HPLC分析; 分析化学

生体内のD-アミノ酸酸化酵素（DAO）およびD-アスパラギン酸酸化酵素（DDO）の活性評価指標による統合失調症の早期かつ客観的診断を可能とするため、2022年度は予備試験でDAO活性変化に伴う尿中含量変化を示した非タンパク質構成アミノであるオルニチンを対象としてエキシマー蛍光誘導体化条件の検討および分離条件検討を行った。エキシマー蛍光誘導体化に用いるピレン試薬としてアミノ基を対象とした蛍光誘導体化試薬である4-(1-Pyrene)butyric acid N-hydroxysuccinimide(PSE) を選定し、反応温度、反応時間および溶媒について検討して最適条件を得た。非タンパク質構成アミノ酸であるオルニチンの生体内含量は極めて低いため、微量成分の高選択的分析を可能とする二次元HPLCシステムを利用して分析法を構築した。一次元目の逆相分離に微粒子充填型カラムを用い、二次元目の光学分割についてはパークル型キラル固定相5種を用いてPSE誘導体化オルニチンの分離検討を行った結果、二次元目において分離度1.7以上の良好な光学分割を達成した。これらの条件を用いて二次元HPLC分析システムを構築し、ヒト尿試料分析に適用した。ピレン誘導体化オルニチンをエキシマー蛍光波長（励起波長345 nmにおける475 nmの蛍光発光）で検出することにより、他の内在性化合物の影響を受けることなくオルニチン鏡像異性体のピーク検出が可能であった。

为了能够利用体内D-氨基酸氧化酶（DAO）和D-天冬氨酸氧化酶（DDO）活性评估指标来早期、客观地诊断精神分裂症，我们将于2022年进行初步测试，以评估DAO活性的变化。鸟氨酸的荧光衍生条件和分离条件，鸟氨酸是一种非蛋白质组成氨基酸，由于尿液变化而显示出尿含量的变化。我们选择了一种针对氨基的荧光衍生化试剂4-(1-芘)丁酸N-羟基琥珀酰亚胺(PSE)作为用于准分子荧光衍生化的芘试剂，并考察了反应温度、反应时间和溶剂的最佳选择。获得了条件。由于鸟氨酸（一种非蛋白氨基酸）在生物体中的含量极低，因此我们构建了一种使用二维 HPLC 系统的分析方法，可以对痕量成分进行高选择性分析。我们研究了 PSE 衍生鸟氨酸的分离，使用颗粒填充柱进行一维反相分离，并使用五种 Parkle 型手性固定相进行第二维光学分辨率，获得了超过 1.7 度的良好光学分辨率。实现了。利用这些条件构建了二维高效液相色谱分析系统，并将其应用于人体尿液样本分析。通过在准分子荧光波长（激发波长为 345 nm 时发出 475 nm 荧光）检测芘衍生鸟氨酸，可以检测鸟氨酸对映体的峰，而不受其他内源化合物的影响。

项目成果

エキシマー蛍光誘導体化を用いたカルノシンの高選択的二次元キラルHPLC分析法の開発

准分子荧光衍生化高选择性二维手性 HPLC 分析肌肽方法的开发

• 发表时间: 2023
• 作者: 新井杏奈;守田羽吟;川末慎葉,;古賀鈴依子;三田真史;浜瀬健司;吉田秀幸;能田均
• 通讯作者: 能田均