動物モデルを用いた出血様式の違いが局所的循環障害と血液凝固障害に与える影響の研究

利用动物模型研究不同出血方式对局部循环障碍和凝血障碍的影响

• 批准号: 21K17326
• 负责人: 古川 翔太
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K17326/
• 关键词: 出血性ショック; ミトコンドリア; 細胞外フラックスアナライザー; 血液凝固線溶系; 出血; 外傷; 局所循環障害; ミトコンドリア呼吸

法医学分野では病死などの場合は心臓内軟凝血がみられ、急死では心臓内に流動血がみられることがよく知られている。また、救急医療分野では外傷・出血により血液凝固が正常に機能しない例が報告されている。これらは出血による組織低酸素状態により凝固系・線溶系の不均衡が起きることが要因とされている。組織低酸素は出血量だけではなく、動脈出血と静脈出血のような出血様式の違いが影響すると考えられる。本研究では動脈性出血と静脈性出血の違いと局所循環との関連を明らかにし、凝固線溶系への影響を検討することを目的としている。方法として動脈性出血モデルと静脈性出血モデルを作成し、それぞれの出血による組織循環障害の現れ方の違いを評価する。組織循環の評価方法として、細胞ミトコンドリアの酸素消費量等を細胞外フラックスアナライザーを用いて測定を試みている。1) 動脈出血モデルラット及び静脈出血モデルラットの作成：大腿動脈及び大腿静脈にカテーテルを挿入し、出血モデルラットを作成した。出血量は全身血液量の45%に設定した。2) ミトコンドリア呼吸の測定：ラット心臓・肝臓・腎臓を破砕し遠心処理によりミトコンドリアを抽出、測定に使用した。動物実験室及び測定室の室温が、臓器破砕処理及びミトコンドリア呼吸に影響する可能性を考慮し、適切な実験環境について検討した。前述の全身血液量45%の出血から1時間後のサンプル臓器で肝臓ミトコンドリア呼吸を測定したところ、動脈出血に比べて静脈出血で最大酸素消費速度が低下する傾向にあった。3) 血液凝固系・線溶系の測定：-80℃保存している血漿・血清サンプルを用いて、凝固線溶系の測定を随時実施する予定である。4) ミトコンドリア構造に関わる蛋白質について調べ、酸素消費との関与を検討する予定である。

众所周知，在法医领域中，软血凝结发生在心脏中，突然死亡，血液在心脏内流动。此外，在紧急医疗领域中，据报道，血液凝结的病例无法正常工作。这些因素是由以下事实引起的：由于出血引起的组织缺氧会导致凝结系统和纤维蛋白水解系统的失衡。组织缺氧不仅受到出血体积的影响，而且受到诸如动脉和静脉出血之类的出血模式的差异。这项研究旨在阐明动脉出血与静脉出血与局部循环之间的关系，并检查对凝血纤维蛋白水解系统的影响。作为一种方法，创建了动脉出血模型和静脉出血模型，以评估由于每种出血而导致的组织循环疾病表现的差异。作为评估组织循环的一种方法，我们尝试使用细胞外通量分析仪来测量细胞线粒体的氧气消耗量。 1）创建动脉出血和静脉出血大鼠的大鼠：导管被插入股动脉和股静脉中，以产生大鼠出血。出血量设置为总血量的45％。 2）线粒体呼吸的测量：将大鼠心脏，肝脏和肾脏挤压，并通过离心提取线粒体，并用于测量。考虑到动物实验室和测量室中的室温可能会影响器官压碎和线粒体呼吸，因此研究了适当的实验环境。当上述出血后1小时测量肝线粒体呼吸，总体血液体积为45％，与动脉出血相比，静脉出血倾向于降低静脉出血的最大氧消耗率。 3）血液凝血和纤维蛋白水解系统的测量：凝血和纤维蛋白水解系统的测量将随时使用-80°C的血浆和血清样品进行。 4）我们计划研究参与线粒体结构的蛋白质，并检查它们参与氧气消耗。