動物モデルを用いた出血様式の違いが局所的循環障害と血液凝固障害に与える影響の研究

利用动物模型研究不同出血方式对局部循环障碍和凝血障碍的影响

• 批准号: 21K17326
• 负责人: 古川 翔太
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K17326/
• 关键词: 出血性ショック; ミトコンドリア; 細胞外フラックスアナライザー; 血液凝固線溶系; 出血; 外傷; 局所循環障害; ミトコンドリア呼吸

法医学分野では病死などの場合は心臓内軟凝血がみられ、急死では心臓内に流動血がみられることがよく知られている。また、救急医療分野では外傷・出血により血液凝固が正常に機能しない例が報告されている。これらは出血による組織低酸素状態により凝固系・線溶系の不均衡が起きることが要因とされている。組織低酸素は出血量だけではなく、動脈出血と静脈出血のような出血様式の違いが影響すると考えられる。本研究では動脈性出血と静脈性出血の違いと局所循環との関連を明らかにし、凝固線溶系への影響を検討することを目的としている。方法として動脈性出血モデルと静脈性出血モデルを作成し、それぞれの出血による組織循環障害の現れ方の違いを評価する。組織循環の評価方法として、細胞ミトコンドリアの酸素消費量等を細胞外フラックスアナライザーを用いて測定を試みている。1) 動脈出血モデルラット及び静脈出血モデルラットの作成：大腿動脈及び大腿静脈にカテーテルを挿入し、出血モデルラットを作成した。出血量は全身血液量の45%に設定した。2) ミトコンドリア呼吸の測定：ラット心臓・肝臓・腎臓を破砕し遠心処理によりミトコンドリアを抽出、測定に使用した。動物実験室及び測定室の室温が、臓器破砕処理及びミトコンドリア呼吸に影響する可能性を考慮し、適切な実験環境について検討した。前述の全身血液量45%の出血から1時間後のサンプル臓器で肝臓ミトコンドリア呼吸を測定したところ、動脈出血に比べて静脈出血で最大酸素消費速度が低下する傾向にあった。3) 血液凝固系・線溶系の測定：-80℃保存している血漿・血清サンプルを用いて、凝固線溶系の測定を随時実施する予定である。4) ミトコンドリア構造に関わる蛋白質について調べ、酸素消費との関与を検討する予定である。

在法医学领域，众所周知，病死者心脏内可见软血块，猝死者心脏内可见液状血液。此外，在急诊医学领域，也有因外伤或出血而导致血液凝固功能不正常的病例报道。这些问题的原因被认为是由于出血引起的组织缺氧导致凝血和纤溶系统失衡。人们认为组织缺氧不仅受到出血量的影响，还受到出血模式差异的影响，例如动脉出血和静脉出血。本研究的目的是阐明动脉出血和静脉出血之间的差异及其与局部循环的关系，并检查它们对凝血和纤溶系统的影响。作为一种方法，我们将创建动脉出血模型和静脉出血模型，并评估每种出血类型导致的组织循环障碍的差异。作为评估组织循环的方法，我们正在尝试使用细胞外通量分析仪测量细胞线粒体的耗氧量。 1)动脉出血模型大鼠和静脉出血模型大鼠的制作：在股动脉和股静脉中插入导管，制作大鼠出血模型。失血量设定为全身血容量的45%。 2)线粒体呼吸测定：将大鼠心脏、肝脏、肾脏粉碎，离心提取线粒体用于测定。考虑到动物实验室和测量室的室温可能影响器官破坏过程和线粒体呼吸，我们考虑了合适的实验环境。当在前述全身血容量45％的出血后1小时在样本器官中测量肝脏线粒体呼吸时，静脉出血的最大耗氧率往往比动脉出血低。 3) 凝血和纤溶系统的测量：将不时使用-80°C保存的血浆和血清样本进行凝血和纤溶系统的测量。 4）我们计划研究参与线粒体结构的蛋白质并检查它们与耗氧量的关系。