唾液含有細胞外小胞を用いた低侵襲な口腔癌の予後予測診断システムの確立

利用唾液细胞外囊泡建立微创口腔癌预后预测系统

基本信息

批准号：
21K16956
负责人：
近藤智豊
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Tokyo Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

エクソソームに代表される細胞外分泌小胞(Extracellular vesicle, EV)はあらゆる細胞から分泌されており、その大きさ、放出機構は多様性に富んでいる。現在、癌の微小環境形成、薬剤耐性獲得、免疫療法の制御などの分子機構を語る上でEVは欠くことできない因子となっている。このような潮流の中、EVを活用した、新しい癌の診断法、治療法の確立が期待されている。これまでに、健常者の唾液が含む「小さなEV(≒エクソソーム)」と「大きなEV」を分けて解析することから、大きなEVは小さなEVとは異なる分子群が運ばれていることを見出してきた。本研究ではこの知見を発展させ、口腔扁平上皮癌患者(OSCC)の唾液に含まれる、予後に関連したマーカー分子がどのEV分画に含まれているかを整理し、EVの大きさ情報も加味した、低侵襲で操作の簡便な新しいOSCC予後診断システムの確立につなげる。今年度は、唾液を「大きなEV」「小さなEV」「さらに小さな可溶性分子」を含む3つの分画に差分遠心法で分け、それぞれのEV分画に対してマーカー解析を行った。これら3分画にOSCCとの関連が報告されているEGFRが、各分画で特異的なパターンで濃縮していることを確認した。また、OSCC切除検体でのEGFR発現を免疫組織学的に評価した結果、唾液3分画において様々なEGFR発現パターンがあるのと同様に、組織でのEGFR発現パターンも異なることがわかった。また、一部の予後不良症例では細胞内に顆粒状にEGFRが発現しており、 EGFR陽性細胞外小胞を含んでいる可能性が示唆された。来年度は、EGFR陽性EVの生化学的、分子生物学的特徴をさらに調査し、OSCCの進行とどのように関連するかを明らかとする。

以外泌体为代表的细胞外囊泡（EV）由所有细胞分泌，其大小和释放机制高度多样化。目前，在讨论癌症微环境形成、耐药性获得和免疫治疗控制的分子机制时，EVs是不可或缺的因素。在这些趋势中，人们对利用电动汽车建立新的癌症诊断和治疗方法抱有很高的期望。到目前为止，通过分别分析健康人唾液中含有的“小EV（≒外泌体）”和“大EV”，我们发现大EV携带着与小EV不同的分子组。在这项研究中，我们通过整理哪些 EV 部分包含与口腔鳞状细胞癌 (OSCC) 患者唾液中预后相关的标记分子，并考虑 EV 大小信息，扩展了这一知识。一种微创且易于操作的新型 OSCC 预后诊断系统。今年，我们利用差速离心将唾液分成三个部分，包括大EV、小EV、甚至更小的可溶性分子，并对每个EV部分进行标记分析。我们证实，据报道与 OSCC 相关的 EGFR 以特定模式富集在每个组分中。此外，通过对 OSCC 切除标本中 EGFR 表达的免疫组织学评估，我们发现，正如三种唾液部分中存在不同的 EGFR 表达模式一样，组织中的 EGFR 表达模式也不同。此外，在一些预后不良的病例中，EGFR在细胞内以颗粒形式表达，表明它们可能含有EGFR阳性的细胞外囊泡。明年，我们将进一步研究EGFR阳性EV的生化和分子生物学特征，并阐明它们与OSCC进展的关系。