新規分子標的治療薬による造精障害メカニズムの解明と精巣毒性バイオマーカーの確立

新型分子靶向治疗药物引起精子发生障碍的机制阐明及睾丸毒性生物标志物的建立

• 批准号: 21K16756
• 负责人: 野崎 哲史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16756/
• 关键词: 精巣毒性; エピゲノム; 精子形成

ヒストン脱メチル化酵素Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1)阻害剤であるNCL1を用いて、Invitro実験を行った。まず、マウスの精原細胞株であるGC-1を用いてChIP-qPCRアッセイを行った。次に、GC-1、マウスのライディッヒ細胞株であるTM3、マウスのセルトリ細胞株であるTM4を用いて、WST assayで細胞増殖能を、flow cytometryでアポトーシスを評価した。LSD1阻害剤はH3K4の脱メチル化を阻害し、がん増殖を抑制する。また、H3のメチル化は、Oct4によって抑制的に制御されることが知られている。そのため、ChIP-qPCRアッセイでは、H3K4me2抗体で免疫沈降を行い、Oct4のプロモーター領域のプライマーを作成し、qPCRを行うことで評価した。その結果、Oct4のメチル化状態が変化していた。WST assay では、GC1,TM3,TM4の各細胞に、0, 5,10,20,30 uMの濃度のNCL1を投与し、WST8で評価した。結果、NCL1の濃度依存的にGC-1の増殖抑制をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。Flow cytometryでは、GC1,TM3,TM4の各細胞に、NCL1 30uMを投与し、7AAD, PE AnexinⅤで評価した。結果、GC1では、アポトーシスの増加をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。

使用NCL1（一种抑制剂）进行Invitro实验，该抑制剂是赖氨酸特异性脱甲基酶1（LSD1）抑制剂。首先，使用小鼠的精神细胞库存GC-1进行了CHIP-QPCR分析。接下来，使用GC-1，TM3，小鼠RIDICH细胞库存和TM4（小鼠的繁殖细胞量），评估细胞增殖能力的细胞增殖能力，并在流式细胞仪中评估了凋亡仪。 LSD1抑制剂抑制H3K4去除，并抑制癌症的增殖。还知道H3的甲基化被OCT4抑制。因此，通过用H3K4ME2抗体进行免疫沉淀来评估CHIP-QPCR分析，在OCT4的启动子区域中产生底漆并进行qPCR。结果，OCT4的甲基化状态正在改变。在WST分析中，将浓度为0、5,10、20、30 UM的NCL1给予GC1，TM3和TM4的每个细胞，并通过WST8评估。结果，NCL1的浓度依赖于GC-1增殖，但在TM3和TM4中没有看到。在流式细胞仪中，将NCL1 30UM用于GC1，TM3和TM4的每个细胞，并通过7AAD，PE -Anexinn对其进行评估。结果，GC1增加了凋亡的增加，但在TM3和TM4中没有看到。

项目成果

ヒストン脱メチル化酵素LSD1阻害剤による精巣毒性メカニズムの解明

组蛋白去甲基化酶LSD1抑制剂诱导睾丸毒性机制的阐明

• 发表时间: 2022
• 作者: 野崎 哲史;岩月 正一郎;内木 拓;鬼頭 拓未;武田 知樹;惠谷 俊紀;神沢 英幸;黒川 覚史;神谷 浩行;梅本 幸裕;安井 孝周
• 通讯作者: 安井 孝周

Identification of active spermatogenesis using a multiphoton microscope

• DOI: 10.1111/andr.13379
• 发表时间: 2023-01
• 期刊: Andrology
• 影响因子: 4.5
• 作者: Tomoki Takeda;Shoichiro Iwatsuki;S. Nozaki;A. Okada;K. Mizuno;Y. Umemoto;T. Yasui

非閉塞性無精子症患者における年齢と精子採取成績の関連

非梗阻性无精症患者年龄与取精结果的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩月 正一郎;梅本 幸裕;武田 知樹;野崎 哲史;吉原 紘行;伴野 千尋;松本 洋介;澤田 祐季;佐藤 剛;杉浦 真弓;安井 孝周
• 通讯作者: 安井 孝周