Effects of ovarian reserve on primordial follicle activation and early follicular growth in cattle

卵巢储备功能对牛原始卵泡激活和早期卵泡生长的影响

基本信息

批准号：
20K15672
负责人：
坂口謙一郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-12-19 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

卵巣内の原始卵胞数は、卵子の受精能や性ステロイドホルモン分泌に関わる卵巣の潜在的能力 (卵巣予備能) と相関し、ヒトや牛の繁殖能力の指標となる。しかし、卵巣予備能が原始卵胞の卵胞発育への動員 (原始卵胞活性化) や、卵胞腔形成前の初期卵胞の発育に及ぼす影響は不明である。本研究は、牛卵胞の体外発育培養 (IVG) 技術を用いて、卵巣予備能が原始卵胞活性化と初期卵胞の発育に及ぼす影響を明らかにし、得られた結果を元に、発生能の高い卵子を生産可能なIVG系を開発することを目的として以下の検討を行った。1)既報に基づき、牛の原始卵胞および二次卵胞のIVGを実施したところ、原始卵胞のIVGでは卵巣組織中に含まれる二次卵胞数は培養後に増加し、二次卵胞のIVGでは、培養後に卵胞直径が増大した。2)培養系が確立できたため、胞状卵胞数が多い牛 (n=12) および胞状卵胞数が少ない牛 (n=12) から左右の卵巣を採取し、原始卵胞のIVGを実施した。これらの卵巣組織は固定・包埋済みであり、今後組織学的な評価を実施する。3)二次卵胞のIVGにおいて、胞状卵胞数が多い牛由来の卵巣からは3.0 ± 2.0個 (平均値 ± 標準偏差) の二次卵胞が採取されたが、胞状卵胞数が少ない牛由来の卵巣からは 0.6 ± 0.9個の二次卵胞しか採取できず、安定して実験を遂行する上では、二次卵胞の採取法を改良する必要があることが示唆された。4)使用済み培養液を用いて、卵子から分泌され、卵子発育に必須な成長因子である成長分化因子-9 (GDF-9) や骨形成タンパク質-15 (BMP-15) が市販のELISAキットにより評価可能かを検証した。GDF-9は全ての検体で測定可能であったが、BMP-15は検出されない検体が多数みられた。今後、免疫組織化学を用いた半定量的解析などの異なる手法を用いて定量が可能かを検証する。

卵巢中原始卵泡的数量与与卵子受精和性类固醇激素分泌相关的卵巢潜力（卵巢储备）相关，是人类和奶牛生殖潜力的指标。然而，卵巢储备功能对原始卵泡募集到卵泡发育（原始卵泡激活）以及卵泡腔形成前早期卵泡发育的影响尚不清楚。本研究利用牛卵泡体外生长培养（IVG）技术来阐明卵巢储备对原始卵泡激活和早期卵泡发育的影响，旨在开发能够产生卵子的IVG系统。 1）根据以往的报道，对牛原始卵泡和次级卵泡进行了IVG，发现在原始卵泡IVG中，培养后卵巢组织中含有的次级卵泡数量增多；后来卵泡直径增大。 2）培养体系建立后，分别采集窦卵泡数量较多的奶牛（n=12）和窦卵泡数量较少的奶牛（n=12）的左右卵巢，并进行原始卵泡IVG执行。这些卵巢组织已被固定和包埋，并将在未来进行组织学评估。 3）在次级卵泡的IVG中，从窦卵泡数量较多的母牛的卵巢中收集了3.0±2.0（平均值±标准差）的次级卵泡，但从窦卵泡数量较少的母牛的卵巢中仅收集了0.6个。实验中可以采集到±0.9个次级卵泡，表明次级卵泡的采集方法需要改进，才能稳定地进行实验。 4)市售的ELISA试剂盒使用使用过的培养基来检测生长分化因子-9（GDF-9）和骨形态发生蛋白-15（BMP-15），它们是卵子分泌的生长因子，对卵子发育至关重要。是否可以使用评估所有样品中均可检测到 GDF-9，但许多样品中未检测到 BMP-15。将来，我们将使用不同的方法（例如使用免疫组织化学的半定量分析）来验证是否可以进行定量。