質量顕微鏡法によるマイクロＲＮＡの可視化

通过质量显微镜观察 microRNA

基本信息

批准号：
16J40109
负责人：
中嶋裕子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya University (2019)Hamamatsu University School of Medicine (2016-2018)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までに、マトリックス塗布方法の検討を行い、ラットの硝子体にアンチセンス核酸を投与して、薬物動態解析を検討した。今年度は、マトリックス塗布の工程における再現性向上のために、新しいマトリックス塗布の技術開発を行った。質量分析イメージングでは、マトリックス塗布がボトルネックとなっている。本研究では、マトリックスが予め塗布されたテープを用いて、マトリックス塗布を行う。4種類の市販のテープ（Scotch tape (CT-18, BH-24), tape 240, tape 850）にTM sprayerを用いて均一にマトリクスを塗布した。マトリックスの種類としては、2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) と α-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid (CHCA)を検討した。イメージング測定の結果、テープ法は、従来のマトリックス法と同様に生体分子をイオン化することが分かった。また、主要なリン脂質であるPC (32:0)のイオンイメージ像を構築した結果、スプレー法と同様な分布を示した。スペクトル強度の定量解析を行った結果、major ionに関しては、Scotch tape CT-18では、スプレー法の8割程度は保持していた。またminor ionに関しては、テープ法によりスプレー法の2倍程度の強度の分子も検出された。このことから、テープ法は、minor ionを高感度に検出できる可能性があることがわかった。本研究で開発したマトリックス塗布テープは、テープを組織サンプルの大きさに切って貼るだけですぐに解析に使用できることから、サンプル調製に要する時間は1分にも満たないと考えられる。本研究の結果は、マトリックス塗布テープが簡便で再現性のよい実験を提供してくれる可能性を示唆した。

到前一年，我们已经研究了基质应用方法，将反义核酸注射到大鼠玻璃体中，并研究了药代动力学分析。今年，我们开发了一种新的基质涂层技术，以提高基质涂层过程的可重复性。矩阵应用是质谱成像的瓶颈。在本研究中，使用预先涂有基质的胶带进行基质应用。使用TM喷雾器将基质均匀地施加到四种类型的市售胶带（透明胶带（CT-18、BH-24）、胶带240和胶带850）上。我们研究了 2,5-二羟基苯甲酸 (DHB) 和 α-氰基-4-羟基肉桂酸 (CHCA) 作为基质类型。成像测量表明，胶带法与传统基质法一样电离生物分子。此外，还构建了主要磷脂 PC (32:0) 的离子图像，并显示出与喷雾法类似的分布。光谱强度定量分析结果表明，与喷雾法相比，透明胶带 CT-18 保留了约 80% 的主要离子。对于微量离子，胶带法检测到的分子强度约为喷雾法的两倍。这表明胶带法具有高灵敏度检测微量离子的潜力。本研究开发的基质涂层胶带只需将胶带切割成组织样本的尺寸并粘贴即可立即用于分析，因此样品制备所需的时间被认为少于1分钟。这项研究的结果表明，基质涂层胶带可以提供简单且可重复的实验。