質量顕微鏡法によるマイクロＲＮＡの可視化

通过质量显微镜观察 microRNA

基本信息

批准号：
16J40109
负责人：
中嶋裕子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya University (2019)Hamamatsu University School of Medicine (2016-2018)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までに、マトリックス塗布方法の検討を行い、ラットの硝子体にアンチセンス核酸を投与して、薬物動態解析を検討した。今年度は、マトリックス塗布の工程における再現性向上のために、新しいマトリックス塗布の技術開発を行った。質量分析イメージングでは、マトリックス塗布がボトルネックとなっている。本研究では、マトリックスが予め塗布されたテープを用いて、マトリックス塗布を行う。4種類の市販のテープ（Scotch tape (CT-18, BH-24), tape 240, tape 850）にTM sprayerを用いて均一にマトリクスを塗布した。マトリックスの種類としては、2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) と α-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid (CHCA)を検討した。イメージング測定の結果、テープ法は、従来のマトリックス法と同様に生体分子をイオン化することが分かった。また、主要なリン脂質であるPC (32:0)のイオンイメージ像を構築した結果、スプレー法と同様な分布を示した。スペクトル強度の定量解析を行った結果、major ionに関しては、Scotch tape CT-18では、スプレー法の8割程度は保持していた。またminor ionに関しては、テープ法によりスプレー法の2倍程度の強度の分子も検出された。このことから、テープ法は、minor ionを高感度に検出できる可能性があることがわかった。本研究で開発したマトリックス塗布テープは、テープを組織サンプルの大きさに切って貼るだけですぐに解析に使用できることから、サンプル調製に要する時間は1分にも満たないと考えられる。本研究の結果は、マトリックス塗布テープが簡便で再現性のよい実験を提供してくれる可能性を示唆した。

直到上一年，我们研究了矩阵施用方法，并通过对大鼠的玻璃体进行反义核酸来研究药代动力学分析。今年，我们开发了新的矩阵涂料技术，以提高矩阵涂料过程中的可重复性。在质谱成像中，矩阵应用是一种瓶颈。在这项研究中，使用带有预先应用矩阵的磁带进行基质涂层。使用TM喷雾器均匀地使用了四种类型的市售磁带（Scotch胶带（CT-18，BH-24），Tape 240，Tape 850）。基质的类型为2,5-二羟基苯甲酸（DHB）和α-Cyano-4-羟基细菌酸（CHCA）。成像测量结果表明，磁带方法以与常规基质方法相同的方式电离生物分子。此外，构建了PC（32：0）的离子图像（32：0），是主要的磷脂，分布与喷雾方法相似。光谱强度的定量分析表明，苏格兰胶带CT-18保留了大约80％的喷雾方法。关于次要离子，通过磁带方法检测到大约是喷雾法的两倍的分子。这表明该磁带方法可以潜在地检测出高灵敏度的小离子。在本研究中开发的基质涂层可以通过简单地将胶带切成组织样品的大小并粘贴它来进行分析，因此人们认为样品制备所需的时间小于1分钟。这项研究的结果表明，基质涂层胶带可能提供简单且可重复的实验。