Analyses on innate immune response for vector-borne virus.

媒介传播病毒的先天免疫反应分析。

基本信息

批准号：
19F19108
负责人：
加藤健太郎
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-07-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19F19108/
关键词：
ベクターボーンウイルスデングウイルス自然免疫応答

项目摘要

デングウイルスは、フラビウイルス科フラビウイルス属のRNAウイルスである。ネッタイシマ蚊等により媒介されるアルボウイルスである。110か国以上で毎年およそ5000万人から1億人が感染する風土病となっている。デング熱の症状は、突然の発熱、頭痛、筋肉や関節の痛み、発疹である。デング熱は12-20%という高い致死率にも関わらず、未だ有効な治療薬やワクチンが開発されていない。現在、抗ウイルス薬やワクチンの開発が進められている。より効果的な治療法の開発や慢性的な病態の緩和のためには、病態に関わる免疫因子の役割の解明が必要である。さらに、宿主の抗ウイルス応答や組織の病態を回復へと導く免疫反応を阻害することなく、治療の標的とすべき免疫因子の同定の必要がある。本研究の目的は、ベクターボーンウイルスであるデングウイルス感染に対する宿主の自然免疫応答（TRIF, MyD88シグナル経路とNLRとの相互作用）について解析を行うことである。まず、宿主細胞として用いるVero-E6, BHK21, C6/36細胞について培養を開始した。C6/36細胞については、当初培養の状態が悪かったため再度分与してもらい、3細胞について大量培養後に冷凍ストックを作製した。次に、デングウイルスの培養を行う。今回はデングウイルスの血清型２のウイルス株を用いて培養を開始した。ここで、本人の家族の健康問題により、急遽帰国することになった。帰国まで間がなかったため、デングウイルスの細胞変性効果を顕微鏡観察では判断できなかったため、PCR法によりウイルス遺伝子の同定を行った。結果として、ウイルス遺伝子に相当するバンドを得たため、ウイルスの存在を確認することができた。

登革热病毒是黄病毒科黄病毒属的RNA病毒。它是一种由埃及伊蚊等蚊子传播的虫媒病毒。它是一种地方病，每年在 110 多个国家感染约 5000 万至 1 亿人。登革热的症状是突然发烧、头痛、肌肉和关节疼痛以及皮疹。尽管登革热的死亡率高达12-20%，但目前尚未开发出有效的治疗方法或疫苗。目前，抗病毒药物和疫苗的开发正在进行中。为了开发更有效的治疗方法并缓解慢性病理状况，有必要阐明免疫因素在病理状况中的作用。此外，需要确定可以作为治疗目标的免疫因子，而不抑制宿主的抗病毒反应或导致组织病理学恢复的免疫反应。本研究的目的是分析宿主针对骨病毒载体登革热病毒感染的先天免疫反应（TRIF、MyD88 信号通路以及与 NLR 的相互作用）。首先，开始培养用作宿主细胞的Vero-E6、BHK21和C6/36细胞。 C6/36细胞最初培养条件较差，因此对其进行重新分配，并在大量培养3个细胞后创建冷冻原种。接下来，培养登革热病毒。这次，我们开始使用登革热病毒血清型2病毒株进行培养。然而，由于家人的健康问题，他不得不突然回国。由于回国时间不久，登革热病毒的细胞病变作用无法通过显微镜观察确定，因此采用PCR技术对病毒基因进行了鉴定。结果得到了与病毒基因对应的条带，因此可以确认病毒的存在。