New therapeutic strategy of bone soft tissue sarcoma by inhibition of defective autophagy with induction by HSP inhibitor

HSP抑制剂诱导抑制缺陷自噬治疗骨软组织肉瘤的新策略

• 批准号: 18K09108
• 负责人: 山本 哲司
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K09108/
• 关键词: 骨軟部肉腫細胞; HSP阻害剤; オートファジー阻害剤; オートファジー; アポトーシス; HSP90; 骨軟部腫瘍

骨軟部肉腫は放射線治療や化学療法に抵抗性が強く、手術治療が選択されることが多い。しかし、手術侵襲を考慮すると、術前化学療法で腫瘍を縮小させることができれば理想的である。このため、既存の化学療法に代わる様々な標的治療薬が開発されおり、その標的因子のひとつに熱ショックタンパク質（HSP）がある。がん細胞において、その発生や増殖、転移を制御するHSPの因子が高発現していることは以前から知られている。しかし、実際に臨床応用されている薬剤は未だ確立されていない。本研究の目的は、骨軟部肉腫細胞に対するHSP阻害剤の効果およびその抵抗性を精査し、その抵抗性を制御することで、新たな術前化学療法の確立を目指すことである。この抗腫瘍薬に対する抵抗性が、防御的オートファジーと考えており、オートファジー阻害剤であるクロロキンを併用した抗腫瘍作用について基礎実験を行った。本研究では、骨軟部肉腫細胞株に対しHSP阻害剤であるSNX-2112を使用し抗腫瘍効果を認めたが、同時にオートファジーが発現していることが確認された。オートファジーがHSP阻害剤の抗腫瘍効果を阻害していると仮定し、SNX-2112とクロロキンを併用し抗腫瘍効果が増強されるかを確認するための実験を行った。クロロキンによりオートファジーが抑制されアポトーシスが誘導されることを、生物生存アッセイ、ウエスタンブロットによるタンパク質の発現、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡による形態学的評価で確認できた。HSP阻害剤は骨肉腫細胞に対してin vitroで効果があることが確認された。また、同時に腫瘍細胞により防御的オートファジーが誘導され抗腫瘍効果が減弱している可能性が示唆された。HSP阻害薬にオートファジー阻害剤を併用することは、骨肉腫に対する新たな治療方法となる可能性が示された。

骨和软组织肉瘤对放射治疗和化疗具有高度抵抗力，常选择手术治疗。但考虑到手术的侵袭性，如果能通过术前化疗使肿瘤缩小那就更理想了。因此，人们开发了各种靶向治疗药物来替代现有的化疗，其中的靶因子之一就是热休克蛋白（HSP）。人们早就知道癌细胞高度表达HSP因子，控制其发育、增殖和转移。然而，目前尚未确定真正应用于临床的药物。本研究的目的是仔细研究HSP抑制剂对骨和软组织肉瘤细胞的作用和耐药性，并控制这种耐药性以建立新的术前化疗方案。我们认为这种对抗肿瘤药物的耐药性是由于保护性自噬所致，并针对联合使用自噬抑制剂氯喹的抗肿瘤作用进行了基础实验。在本研究中，我们观察了HSP抑制剂SNX-2112对骨和软组织肉瘤细胞系的抗肿瘤作用，同时我们证实了自噬的表达。假设自噬抑制HSP抑制剂的抗肿瘤作用，我们进行了一项实验来确认SNX-2112与氯喹联合使用是否会增强抗肿瘤作用。通过生物存活测定、Western blotting蛋白表达、流式细胞术和荧光显微镜形态学评估证实氯喹抑制自噬并诱导细胞凋亡。 HSP抑制剂在体外被证实对骨肉瘤细胞有效。也有人提出，肿瘤细胞可能同时诱导保护性自噬，从而降低抗肿瘤作用。 HSP抑制剂和自噬抑制剂的组合已被证明有潜力成为骨肉瘤的新治疗方法。

项目成果

HSP90阻害薬とオートファジー阻害薬の併用によるKTH細胞に対する抗腫瘍効果の検討

检测HSP90抑制剂与自噬抑制剂联合对KTH细胞的抗肿瘤作用

• 发表时间: 2019
• 作者: 野村 優美;中村 修;山上 佳樹;福岡 奈津子;石橋 洋一;根ヶ山 敬大;山本 哲司
• 通讯作者: 山本 哲司

HSP90阻害薬とオートファジー阻害薬の併用によるMG63細胞に対する抗腫瘍効果の検討

检查HSP90抑制剂和自噬抑制剂联合对MG63细胞的抗肿瘤作用

• 发表时间: 2019
• 作者: 野村 優美;中村 修;山上 佳樹;福岡 奈津子;石橋 洋一;根ヶ山 敬大;山本 哲司
• 通讯作者: 山本 哲司

The combination of SNX-2112 and autophagy inhibitors improves the growth inhibitory effect of MG63 cells.

SNX-2112与自噬抑制剂联用可提高MG63细胞的生长抑制效果。

• 发表时间: 2019
• 作者: Nomura Yumi;Nakamura Osamu;Yamagami Yoshiki;Nishimura Hideki;Fukuoka Natsuko;Ishibashi Yoich;Yamamoto Tetsuji
• 通讯作者: Yamamoto Tetsuji

MG63細胞に対するオートファジー阻害薬とHSP阻害薬の併用による抗腫瘍効果の検討

自噬抑制剂与HSP抑制剂联合使用对MG63细胞的抗肿瘤作用考察

• 发表时间: 2020
• 作者: 野村 優美;中村 修;山上 佳樹;西村 英樹;福岡 奈津子;石橋 洋一;根ヶ山 敬大;山本 哲司
• 通讯作者: 山本 哲司

Efficacy of Hsp90 inhibitor SNX2112 with autophagy inhibitor for KTH cells

Hsp90抑制剂SNX2112与自噬抑制剂对KTH细胞的功效

• 发表时间: 2020
• 作者: Nomura Yumi;Nakamura Osamu;Yamagami Yoshiki;Nishimura Hideki;Fukuoka Natsuko;Ishibashi Yoichi;Negayama Takahiro;Yamamoto Tetsuji
• 通讯作者: Yamamoto Tetsuji