異なる遺伝子背景に起因する抗核抗体値上昇機構の解析

不同遗传背景引起抗核抗体水平升高的机制分析

• 批准号: 18K06027
• 负责人: 伊藤 禎洋
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K06027/
• 关键词: アレルギー; 免疫反応の系統差; 皮膚疾患; 肥満と突然死; 自己免疫疾患; 炎症の系統差; 血清アミロイドP成分; ゲノム編集; miRNA; 転写因子; 結合配列; 抗核抗体価の上昇; ゲノム編集技術; マウスの遺伝子背景

我々は、当初、抗核抗体価の上昇を指標として、C57BL/6系統の遺伝子背景（Apcs-/-; 129/Sv//Ev × C57BL/6）に存在する129/Sv//Ev領域｛D1Mit36（76.73cM）からD1Mit115（82.78cM）｝の免疫に関係する遺伝子群をランダムに20遺伝子、ゲノム編集法で破壊する予定でいた。そのため、ホモ個体1匹について、全ゲノムシーケンスを行った。しかし、Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Aug 22;114(34):9158-9163.Complete overview of protein-inactivating sequence variations in 36 sequenced mouse inbred strainsの論文より、C3H/Heマウスは、LPS刺激、IL1α経由の感染に対して耐性であると解った。このことにより、C3H/He系統の遺伝子背景では、炎症のシグナルが入らないために抗核抗体値上昇が起きないのであろうと強く推測された。従って、同じように、ゲノム編集法で破壊した遺伝子が、抗核抗体価の上昇に関わる遺伝子であるか否かが解るが、抗核抗体値上昇の原因であるとは、到底、結論出来ないと解った。また、ホモ個体群を飼育するうちに、1年半をすぎて、肥満して突然死する個体、及び前脚と後脚の間の腹部を体液が出る程、掻きむしる個体がでてきた。免疫に関わると思われる表現系が現れたことで、まず皮膚アレルギー発症を疑って、リアルタイムPCRによる解析を行うことにした。しかしながら、コロナウィルス感染症蔓延の影響で、使用予定のキット・プラスチック消耗品の入荷が遅れ、加えて、動物実験施設改修の影響を受けてしまった。

我们最初调查了 C57BL/6 菌株的遗传背景 (Apcs-/-; 129/Sv//Ev ×我们计划使用基因组编辑随机破坏 C57BL/6 中存在的 129/Sv//Ev 区域 {D1Mit36 (76.73cM) 至 D1Mit115 (82.78cM)} 中与免疫相关的 20 个基因。因此，我们对一名纯合个体进行了全基因组测序。然而，从论文 Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Aug 22;114(34):9158-9163. 36 个已测序小鼠近交系中蛋白质失活序列变异的完整概述中，C3H/He 小鼠对 LPS 刺激敏感， IL1α 被发现对感染有抵抗力由此强烈推测，C3H/He株的遗传背景不会导致抗核抗体水平升高，因为没有输入炎症信号。因此，同样可以确定被基因组编辑方法破坏的基因是否是参与抗核抗体效价升高的基因，但不能断定它是抗核抗体效价升高的原因。 。此外，在保持纯合种群的同时，有些个体变得肥胖，一年半后突然死亡，有些个体将前腿和后腿之间的腹部抓破，甚至有液体流出。在出现被认为与免疫相关的表达系统后，我们首先怀疑是皮肤过敏，并决定使用实时 PCR 进行分析。然而，由于冠状病毒感染的蔓延，原定使用的试剂盒和塑料耗材的到达被推迟，此外，该项目还受到动物试验设施翻修的影响。