腫瘍由来エクソソームによる膵癌マルチオミクス・プロファイリングの挑戦と臨床応用

使用肿瘤源性外泌体进行胰腺癌多组学分析的挑战和临床应用

• 批准号: 19K09214
• 负责人: 山田 豪
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09214/
• 关键词: 膵癌; エクソソーム; マルチオミクス; 上皮間葉転換; 再発様式; miRNA; リピドーム

膵癌は局所進展タイプと遠隔転移タイプに大きく二分され、さらにサブタイプ分類されるというのが我々の仮説である。術前に組織採取が困難な膵癌ではリキッドバイオプシーが有用であるため、本研究では血液検体から抽出したエクソソームの情報を基に膵癌サブタイプ分類の確立と臨床応用を目的とした。まずは膵癌切除例の術前血液検体から初発再発形式ごとに検体を選択し、エクソソームを抽出した上で核酸分子に対する網羅的なmRNA解析およびmicroRNA解析を行い、その他の分子の中で脂質は炎症・免疫応答・癌の進展等のシグナル伝達において重要な役割を果たすことからエクソソーム中のリピドーム解析を行うこととした。当科で治療を受けた膵癌患者の治療前血液検体を用い、エクソソーム中に含まれるmicroRNAの網羅的解析を行った。経過中肝転移・肺転移・腹膜播種等の遠隔転移を起こした症例が10例、局所再発が5例、無再発例が5例含まれていた。エクソソームを抽出後、BGISEQ-500を用いた解析をしたところ、各再発・無再発形式によって群分けした場合のmiRNA発現で差を認めたものを抽出し、解析を行った。次にエクソソーム内の脂質に注目し、リピドーム解析を行った(shotgun法およびtargeted lipidomics assay)。その結果、各再発・無再発形式により特徴的なリピドームの高低が抽出され、特にあるリピドームクラスについては無再発群と再発群でP=0.057と有意差はないものの含有量の違いを認める結果であった。さらにエクソソーム中のmRNAについて次世代シーケンサーによる網羅的解析を行い、再発・無再発形式別での血液由来エクソソーム内における発現差異解析を行った。

我们的假设是，胰腺癌可大致分为局部晚期和远处转移类型，并进一步分为亚型。由于液体活检对于术前组织采集困难的胰腺癌很有用，本研究旨在根据从血液样本中提取的外泌体信息建立胰腺癌亚型分类和临床应用。首先，我们从胰腺癌切除病例的术前血液样本中选择每种类型的初始复发样本，提取外泌体，并对核酸分子进行全面的 mRNA 和 microRNA 分析。我们决定分析外泌体中的脂质组，因为它们发挥着重要作用。免疫反应和癌症进展等信号传递。我们使用来自我们科室治疗的胰腺癌患者的治疗前血液样本对外泌体中所含的 microRNA 进行了全面分析。病程中10例出现肝转移、肺转移、腹膜播散等远处转移，5例出现局部复发，5例未复发。提取外泌体后，我们使用 BGISEQ-500 对其进行分析，并提取并分析根据复发/非复发类型分组时 miRNA 表达存在差异的外泌体。接下来，我们关注外泌体中的脂质并进行脂质组分析（鸟枪法和靶向脂质组学测定）。结果，针对每种复发/非复发类型提取了特征脂质组高度，特别是对于一种脂质组类别，非复发组和复发组之间存在含量差异，尽管没有显着差异（ P=0.057）。此外，我们使用下一代测序仪对外泌体中的 mRNA 进行了全面分析，并根据复发和非复发类型分析了血液来源的外泌体中的差异表达。