亜鉛輸送担体に着目した脳卒中後遺症に関わるミクログリア極性転換の制御機構の解明

以锌转运蛋白为中心阐明中风后遗症相关小胶质细胞极性转换的控制机制

• 批准号: 19J23044
• 负责人: 新武 享朗
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J23044/
• 关键词: ミクログリア; 亜鉛トランスポーター; 亜鉛; ミクログリア; 亜鉛トランスポーター; 亜鉛

本年度は、マウス由来ミクログリア細胞株BV-2におけるM2/M1極性転換に対する細胞外Zn2+の影響について調べるため、BV-2にM2誘導薬であるIL-4と同時にZnCl2を18時間処置後、細胞を洗浄した。その後、M1極性誘導薬であるリポ多糖（LPS）の24時間処置によりM2/M1極性転換を誘導し、M1極性マーカーである炎症性サイトカイン量についてELISA法により検討した。その結果、ZnCl2処置によって炎症性サイトカイン量が減少していた。次に、M2ミクログリアにおける亜鉛トランスポーター遺伝子の発現変化について調べたところ、IL-4添加12時間後にZIP12遺伝子の発現量がコントロール群と比して著明に増加していた。そこで、siRNAを用いてBV-2のZIP12をノックダウン（KD）した。ZIP12 KD BV-2に対して細胞内Zn2+指示薬であるFluoZin-3AMを用いてM2ミクログリアにおける細胞内Zn2+動態について検討した。その結果、scRNA処置群ではZnCl2添加によってFluoZinシグナルが増加したのに対して、siRNA処置群ではFluoZinシグナルの増加が認められなかった。最後にZIP12 KD BV-2におけるM2/M1極性転換に対する細胞外Zn2+の影響について調べるため、BV-2にIL-4とZnCl2を同時に処置し、IL-4処置18時間後に細胞を洗浄した。その後、LPSの24時間処置によりM2/M1極性転換を誘導し、炎症性サイトカイン量についてELISA法により検討した。その結果、ZIP12 KDによってZnCl2による炎症性サイトカイン分泌抑制効果が減弱した。以上の知見から、細胞外Zn2+がZIP12を介して細胞内に取り込まれ、M2/M1極性転換後の炎症性サイトカイン分泌を抑制していることが示唆された。

在今年，为了研究小鼠衍生的小胶质细胞系BV-2中细胞外Zn2+对M2/M1极性转化的影响，用IL-4，M2诱导剂处理BV-2后洗涤细胞，并洗涤细胞。之后，通过用M1极性诱导剂脂多糖（LPS）处理24小时的M2/M1极性转化率，ELISA检查了M1极性标记物的炎性细胞因子的量。结果，用ZNCL2治疗减少了炎性细胞因子的量。接下来，当我们研究M2小胶质细胞中锌转运蛋白基因表达的变化时，Zip12基因的表达水平在IL-4后12小时显着增加。因此，使用siRNA击倒BV-2的（KD）Zip12。使用细胞内Zn2+指示剂Fluozin-3am对M2小胶质细胞中的细胞内Zn2+动力学研究了Zip12 kD BV-2。结果，ZNCL2的添加增加了经过SCRNA处理组中的氟辛信号，而在siRNA处理的组中未观察到荧光素信号的增加。最后，为了研究细胞外Zn2+对Zip12 kD BV-2中M2/M1极性转化的影响，将BV-2与IL-4和ZNCL2同时处理，并在IL-4处理后18小时洗涤细胞。之后，用LPS 24小时治疗M2/M1极性转化，并通过ELISA检查了炎性细胞因子的量。结果，Zip12 KD减弱了ZnCl2的作用，抑制了炎症性细胞因子分泌。上面的发现表明，细胞外Zn2+通过Zip12细胞内吸收，从而抑制了M2/M1极化过渡后炎症细胞因子分泌。