易傷害性肝グラフトの至適体外灌流法と非侵襲的グラフト機能評価法の開発

易损伤肝移植物最佳体外灌注方法及无创移植物功能评价方法的建立

基本信息

批准号：
20H03737
负责人：
嶋村剛
金额：
$ 11.48万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

肝移植におけるドナー不足は未解決であり、心停止肝や脂肪肝の安全な利用が望まれる。本課題は、1) MPの至適条件、2) MP中の薬物性コンディショニングの効果を明らかにし、それらの試料解析により、3) 移植前グラフト機能評価法の確立を目指して検討した。SHRSP5-Dmcr ratに高脂肪高コレステロール食を給餌し、脂肪肝を作成し、脂肪化の程度をMRIで評価する方法論を確立した。脂肪肝を新液で冷保存し、再灌流後の肝機能を評価したが、強い保護効果の提示には至らなかった。ラット長時間冷保存肝、心停止肝の３時間冷保存をpH調整UW-MP液で機械灌流し、各温度での至適pHを見出した (data非開示)。また、これらの易障害性肝グラフトに対する機械灌流中の水素ガス投与は血管抵抗を減弱したが、臓器機能の改善には至らなかった。しかし、末梢循環改善によって末梢組織の構築は著明に改善された。肝表面から水素ガスを浸透させることで末梢循環を制御できる可能性が示唆された。各温度で灌流した肝組織は、機械灌流終了時はもとより、37℃再灌流後にもミトコンドリアのクリステの構造が保たれていた。また、電子伝達系複合体Ⅰの機能障害で漏出するフラビンモノヌクレオチド (FMN) を低温酸素化灌流の灌流液でHPLC測定すると、FMN量が再灌流後の胆汁産生量、ALT漏出などを予測し得るマーカーであったが、同じ蛍光波長で検出されるリボフラビン (RF)、フラビンアデニンジヌクレオチド (FAD) は障害の予測には適さず、HPLCで分離してから蛍光測定することが重要と考えられた。タンパク質、メタボローム、レドックス・酸化ストレス、オスミウム浸軟SEM、LC-MS/MS (リピドミクス)などの解析条件を確立したので、各温度での機械灌流の至適pHで灌流した肝組織の採取を終え、順次解析を進めている。

肝移植供体短缺的问题仍未解决，需要安全使用心脏骤停肝和脂肪肝。该项目的目的是阐明1）MP的最佳条件，2）药物调理对MP的影响，并通过样本分析，建立3）移植前评估移植物功能的方法。我们建立了一种方法，用高脂肪、高胆固醇饮食喂养 SHRSP5-Dmcr 大鼠，形成脂肪肝，并使用 MRI 评估脂肪变性程度。用新鲜溶液冷保存脂肪肝，再灌注后评估肝功能，但没有表现出强烈的保护作用。我们用调节pH的UW-MP溶液机械灌注长期冷保存的大鼠肝脏和心脏骤停肝脏3小时，并找到了每个温度下的最佳pH（数据未公开）。此外，在对这些脆弱的肝移植物进行机械灌注期间施用氢气会减弱血管阻力，但不会改善器官功能。然而，通过改善外周循环，外周组织的结构得到显着改善。有人提出，可以通过使氢气渗透到肝脏表面来控制末梢循环。在各温度灌注的肝组织中，线粒体嵴结构不仅在机械灌注结束时得以维持，而且在37℃再灌注后也得以维持。此外，对低温含氧灌注液中由于电子传递链复合物 I 功能障碍而泄漏的黄素单核苷酸 (FMN) 进行 HPLC 测量，结果表明 FMN 的量可预测再灌注后核黄素 (RF) 和 ALT 的产生和 ALT 泄漏。在相同的荧光波长下检测到的黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）是可以获得的标记。不适合预测疾病，通过 HPLC 分离它然后测量其荧光被认为很重要。建立了蛋白质、代谢组、氧化还原/氧化应激、锇浸渍SEM、LC-MS/MS（脂质组学）等分析条件，完成了在各温度下机器灌注的最佳pH下灌注的肝组织的收集。我们正在进行序贯分析。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

De novo hepatocellular carcinoma developing in the living donor liver grafts: A Japanese multicenter experience

活体肝移植中发生的新发肝细胞癌：日本多中心经验

DOI：
10.1111/hepr.13565
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
4.2
作者：
Goto R; Kosai
通讯作者：
Kosai

臓器提供推進委員会企画「医療者の意思表示率の実際と促進策」

器官捐献促进委员会项目《医务人员意愿申报实际率及促进措施》

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
嶋村剛
通讯作者：
嶋村剛

生体肝移植ドナーの長期経過後の脂肪肝リスクの検討

活体肝移植供者长期进展后脂肪肝风险的检查

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
後藤了一;嶋村剛;川村典生;渡辺正明;巖築慶一;渋谷一陽;神山俊哉;武冨紹信
通讯作者：
武冨紹信

Outcome of Living-Donor Liver Transplantation Using Grafts from Donors Treated for Fatty Liver

使用接受脂肪肝治疗的供体的移植物进行活体肝移植的结果

DOI：
10.12659/aot.920677
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
1.1
作者：
Fujii Yuki;Kawamura Norio;Zaitsu Masaaki;Watanabe Masaaki;Goto Ryoichi;Kamiyama Toshiya;Taketomi Akinobu;Shimamura Tsuyoshi
通讯作者：
Shimamura Tsuyoshi

Imaging Mass Spectrometry Reveals the Changes in the Taurine Conjugates of Dihydroxycholanoic Acid During Hepatic Warm Ischemia and Reperfusion in a Rat Model

成像质谱揭示大鼠模型肝脏热缺血和再灌注期间二羟基胆烷酸牛磺酸缀合物的变化

DOI：
10.1016/j.transproceed.2020.01.169
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0.9
作者：
Shibata Kengo; Hayasaka Takahiro; Hashimoto Satsuki; Umemoto Kohei; Ishikawa Takahisa; Sakamoto Sodai; Kato Koichi; Shimada Shingo; Kawamura Norio; Wakayama Kenji; Kobayashi Nozomi; Hama Yuka; Fukai Moto; Shimamura Tsuyoshi; Taketomi Akinobu
通讯作者：
Taketomi Akinobu