Regulatory mechanisms of primordial follicle activation mediated by RNA-binding proteins

RNA结合蛋白介导的原始卵泡激活的调节机制

基本信息

批准号：
20H03267
负责人：
加藤譲
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Osaka University (2023)National Institute of Genetics (2020-2022)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03267/
关键词：
卵子形成マウス原始卵胞 RNA制御卵巣卵母細胞

项目摘要

哺乳動物において卵子は最も未成熟な卵胞である原始卵胞を供給源として維持しつつ、逐次的にその一部の卵胞成長を活性化することにより産生される。したがって、長期に渡り卵子を産生し続けるためには原始卵胞の維持と活性化が適切に制御されなければならない。しかし、その分子機構に関する知見は未だ乏しい。本研究ではマウスをモデルとして、継続的な卵子形成機構の理解に取り組む。具体的には、原始卵胞における卵母細胞の活性化制御に関わる2つのRNA結合タンパク質(タンパク質A, B)に着目し、RNA制御機構が介する卵母細胞の活性化制御機構の解明を目的とする。翻訳促進に関わるタンパク質Aの卵母細胞における過剰発現は卵母細胞の活性化を促進する。一方、RNAの分解に関わるタンパク質Bは遺伝子ノックアウトにより卵母細胞の活性化を促進する。すなわちAは卵母細胞活性化の促進に働き、Bは卵母細胞活性化の抑制に働くと考えられる。そこで本研究ではAB両タンパク質に結合するRNA及び相互作用因子の同定から、卵母細胞の活性化制御に関わるRNA制御メカニズムの解明を目指している。これまでに、質量分析によりAと共沈澱するタンパク質を網羅的に同定した他、Bノックアウトマウスから卵母細胞を単離し、RNA-seqによる遺伝子発現変化を解析してきた。一方、ヒトの家族性早発卵巣不全患者においてA遺伝子に2ヶ所の点変異を有することが新たに見出された。そこで本年度では同変異を持つマウスラインを作成して不妊症様の表現型を呈するか解析するため、交配実験を行なった。

在哺乳动物中，卵子是通过维持最不成熟的卵泡（原始卵泡）作为来源并随后激活其中一些卵泡的生长来产生的。因此，为了长期持续产卵，必须适当控制原始卵泡的维持和激活。然而，关于其分子机制的知识仍然很少。在这项研究中，我们将使用小鼠作为模型来了解卵母细胞的持续形成机制。具体来说，我们关注了参与控制原始卵泡中卵母细胞激活的两种RNA结合蛋白（蛋白A和B），旨在阐明RNA控制机制介导的控制卵母细胞激活的机制。卵母细胞中参与翻译促进的蛋白 A 的过度表达可促进卵母细胞活化。另一方面，参与RNA降解的蛋白B通过基因敲除促进卵母细胞活化。即，认为A起到促进卵母细胞活化的作用，B起到抑制卵母细胞活化的作用。因此，在这项研究中，我们的目标是通过鉴定与两种 AB 蛋白结合的 RNA 和相互作用因子来阐明参与控制卵母细胞激活的 RNA 控制机制。到目前为止，除了利用质谱全面鉴定与A共沉淀的蛋白质外，我们还从B敲除小鼠中分离出卵母细胞，并利用RNA-seq分析了基因表达变化。另一方面，新发现人类家族性卵巢早衰患者的A基因存在两个点突变。因此，今年，我们创建了具有相同突变的小鼠品系，并进行了杂交实验，以分析其是否表现出类似不育的表型。