高度オルガノイド技術を利用した革新的がん遺伝子治療モデリングと腫瘍溶解性機構解明

使用先进的类器官技术创新癌症基因治疗模型并阐明肿瘤溶解机制

基本信息

批准号：
21H03828
负责人：
宮川世志幸
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、腫瘍溶解性ウイルス（OV）の腫瘍選択性機構と間葉系幹細胞（MSC）との併用療法における分子機構解明を目的として、がん免疫微小環境を高度オルガノイド技術によりin vitroで再構築し、遺伝子発現・動態・細胞間及びウイルス-細胞間相互作用を詳細に究明する。今年度は、前年度までに構築した膵がん細胞株スフェロイド３次元培養モデル及び膵がん患者検体由来オルガノイドモデルを用いて、ヒト組織由来MSCの特性解析を進めること、OVあるいはOV搭載MSCの動態観察し、がんオルガノイドへの走化性・浸潤の解析を行うことを目的としていた。前年度確立した腫瘍スフェロイドモデルとMSC共培養系を用いて、ヒト各組織由来MSCの遊走性について解析を進めていたが、本年度は共焦点レーザー顕微鏡を用いた詳細な経時的かつ定量的解析を行った。その結果、３次元培養下において特定の組織由来MSCは他の組織由来MSCと比較して有意に腫瘍に対する遊走性が高いこと、一方でヒト線維芽細胞由来スフェロイドとの共培養系では遊走性を示さないことが判明した。またヒト各組織由来MSCを用いたOV搭載MSCの作製及びがんオルガノイドモデルにおける動態観察を目的として、蛍光タンパク質を搭載したOVを構築し、ヒト各組織由来MSCに対する感受性を評価した。その結果、OVに対する感受性は由来組織によって大きく異なることが明らかとなった。感受性の違いが何に起因するか解析するために、ヒト各組織由来MSCに対するOVの感染性及び複製効率を調査した。その結果、感染性は組織間で差は認められないが、複製効率には有意な差が認められたことからOVに対する感受性の差はOVの複製効率によるものと推察された。

在本研究中，我们利用先进的类器官技术在体外重建了癌症免疫微环境，旨在阐明溶瘤病毒（OV）的肿瘤选择性机制以及与间充质干细胞（MSC）联合治疗的分子机制。将构建病毒并详细研究基因表达、动力学、细胞与细胞以及病毒与细胞的相互作用。本财年，我们将利用上一年构建的胰腺癌细胞系球体三维培养模型和胰腺癌患者样本来源的类器官模型，进行人体组织来源的间充质干细胞的特征分析。观察癌症类器官的动态并分析其趋化性和对癌症类器官的侵袭。利用去年建立的肿瘤球体模型和间充质干细胞共培养系统，我们继续分析来自各种人体组织的间充质干细胞的迁移特性，但今年我们将利用共焦激光显微镜进行详细的纵向和定量分析去了。结果，我们发现，与源自其他组织的 MSC 相比，源自某些组织的 MSC 在 3D 培养中具有显着更高的肿瘤迁移能力，而在与人成纤维细胞衍生的球体共培养系统中，它们表现出显着更高的肿瘤迁移能力。结果发现并没有任何迹象。此外，为了使用源自各种人体组织的MSC生产负载OV的MSC并观察其在癌症类器官模型中的动态，我们构建了负载荧光蛋白的OV，并评估了它们对源自各种人体组织的MSC的敏感性。结果表明，OV 的易感性根据来源组织的不同而有很大差异。为了分析造成敏感性差异的原因，我们研究了OV对源自不同人体组织的MSC的感染性和复制效率。结果，在组织之间没有观察到感染性的差异，但观察到复制效率的显着差异，这表明对OV的易感性的差异是由于OV的复制效率造成的。

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Functional characterization of vector-producing amniotic mesenchymal stem cells (VP-AMSCs) generated by optimized electroporation protocols.

通过优化的电穿孔方案产生的载体生产羊膜间充质干细胞 (VP-AMSC) 的功能表征。

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yoshiyuki Yamazaki; Yuko Nitahara
通讯作者：
Yuko Nitahara

The comparison between human mesenchymal stem cells from different sources for oncolytic viral therapy.

不同来源的人间充质干细胞用于溶瘤病毒治疗的比较。

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Makoto Sukegawa; Yoshitaka Miyagawa; Seiji Kuroda; Motoko Yamamoto; Kumi Adachi; Nobuhiko Taniai; Hiroshi Yoshida; Akihiro Umezawa; Mashito Sakai; Takashi Okada.
通讯作者：
Takashi Okada.

Evaluation of parameters for efficient purification and long-term storage of herpes simplex virus-based vectors

基于单纯疱疹病毒的载体的有效纯化和长期保存参数的评估

DOI：
10.1016/j.omtm.2022.06.007
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kuroda Seiji;Miyagawa Yoshitaka;Sukegawa Makoto;Tomono Taro;Yamamoto Motoko;Adachi Kumi;Verlengia Gianluca;Goins William F.;Cohen Justus B.;Glorioso Joseph C.;Okada Takashi
通讯作者：
Okada Takashi

一過性局所脳虚血モデルにおけるiPSC由来間葉系幹細胞（iMSC）の脳保護効果.

iPSC 衍生的间充质干细胞 (iMSC) 在短暂性局灶性脑缺血模型中的脑保护作用。