Development of therapeutically active nanomaterials: lipoprotein structure/function-based therapeutic strategies to treat intractable ocular diseases

治疗活性纳米材料的开发：基于脂蛋白结构/功能的治疗策略治疗难治性眼部疾病

基本信息

批准号：
21H03821
负责人：
村上達也
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Toyama Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）に含まれる脂質結合タンパク質ａｐｏＡ－Ｉの１０個の両親媒性αヘリックスの中から、コール酸ナトリウム法によって、リン脂質と反応してＨＤＬ様粒子を形成するαヘリックス領域のペプチド（ペプチドＸ）を見出した。今年度、Ｘペプチドが形成するＨＤＬ様粒子の機能解析を行うために、Ｘペプチドの大量合成を行い、４０ｍｇ程度を得た（純度＞９５％）。既報で用いられたＨＤＬ様粒子作製法（リポソーム法）において、ポジコンとして用いたＣ末端ペプチド（ペプチド１０）では形成が見られ、ペプチドＸはＨＤＬ様粒子では見られないことを確認した。ゼブラフィッシュ幼魚を用いる血管内皮接着性ｉｎ　ｖｉｖｏ評価システムを開発することに成功した。蛍光脂質を含む３種類のＨＤＬ改変体（多様な細胞親和性を示す）およびリポソーム、ポリエチレングリコール修飾リポソームをゼブラフィッシュ幼魚のキュビエ管（静脈に相当）に注射し、共焦点蛍光顕微鏡および実体蛍光顕微鏡の両者でｉｎ　ｖｉｖｏ蛍光イメージングを行った。前者では主に血液由来蛍光を検出し、後者では血液と血管両方からの蛍光を検出した。これらのデータの差は、血管内皮に接着した成分からの蛍光に相当する。こうして得られた５サンプルのデータは、同蛍光ラベルサンプルをマウス尾静脈内投与後に採取された大動脈血管内皮の表面からの蛍光データと良く相関した（Ｒ２＞０．９）。すなわち静脈内投与されたＨＤＬ改変体およびリポソームのマウス血管内皮接着性は、ゼブラフィッシュを用いて推測できることが明らかになった。さらにゼブラフィッシュ幼魚における上記５サンプルの血中滞留性は、マウスにおけるそれと良く相関することもわかった（Ｒ２＞０．９）。従って血中滞留性評価において、ゼブラフィッシュ幼魚はマウスを代替できることが明らかになった。

去年，从高密度脂蛋白（HDL）中脂质结合蛋白apoA-I的10个两亲性α螺旋中，通过胆酸钠法选择α螺旋与磷脂反应形成HDL样颗粒发现了螺旋区肽（肽X）。今年，为了对X肽形成的HDL样颗粒进行功能分析，我们合成了大量的X肽，获得了约40mg（纯度>95%）。在之前的报告中使用的HDL样粒子制造方法（脂质体法）中，确认以C末端肽（肽10）作为阳性对照观察到形成，在HDL-中未观察到肽X。像粒子一样。我们已经成功开发了一种利用幼年斑马鱼进行血管内皮粘附的体内评估系统。将含有荧光脂质（表现出各种细胞向性）、脂质体和聚乙二醇修饰的脂质体的三种类型的HDL变体注射到幼年斑马鱼的居维叶管（相当于静脉）中，并使用共聚焦荧光显微镜和立体荧光显微镜进行分析。对两者进行体内荧光成像。前者主要检测血液来源的荧光，而后者检测血液和血管的荧光。这些数据的差异对应于粘附在血管内皮上的成分的荧光。由此获得的5个样品的数据与将相同的荧光标记样品注入小鼠尾静脉后收集的主动脉血管内皮表面的荧光数据具有良好的相关性（R2>0.9）。换句话说，已经表明，可以使用斑马鱼来估计静脉内施用的HDL变体和脂质体对小鼠血管内皮细胞的粘附。此外，还发现上述5个样本在幼年斑马鱼中的血液滞留与小鼠中的相关性良好（R2>0.9）。因此，很明显斑马鱼幼鱼可以替代小鼠进行血液保留评估。

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

バーゼル大学(スイス)

巴塞尔大学（瑞士）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Donor-Acceptor-Linked Molecules for Controlling the Membrane Potential of Living Cells

用于控制活细胞膜电位的供体-受体连接分子

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Murakami
通讯作者：
T. Murakami

Potential of engineered lipoprotein eye drops for the treatment of age-related macular degeneration

工程脂蛋白滴眼液治疗年龄相关性黄斑变性的潜力

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
FUKUDA; Ryosuke;NARGIS; Mahmuda;KAWAKAMI; Ryo;NAGAI; Yoshinori;NAKANO; Eri;SUDA; Kenji;TSUJIKAWA; Akitaka;MURAKAMI; Tatsuya
通讯作者：
Tatsuya

アクティブターゲティング能を付与した治療用ナノ粒子の作製と生物活性評価

主动靶向治疗纳米颗粒的制备及生物活性评价