最も少ない労力で行える溺死の補助診断検査：法医実務に合わせた最も効果的な活用法

一种最省力的溺水辅助诊断测试：在法医实践中使用它的最有效方法

基本信息

批准号：
21H03215
负责人：
湯川修弘
金额：
$ 11.15万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

死後の溺死診断において，珪藻類などの水中の微生物を肺や血液，腎臓や肝臓などから検出できれば，生前に水を吸引した可能性が高くなる。そのため珪藻を指標としたプランクトン（珪藻）検査は溺水の吸引を示唆する重要な検査として位置付けられている。しかし，その検査方法は未だ充分に確立できておらず，改善すべき課題が残されている。そこで本研究では，珪藻検査の検出感度や特異性を最適化するために検査方法のさらなる改善に取り組んだ。組織の溶解において古くから硝酸や過酸化水素と共に硫酸も使用されてきた。しかし粘性や比重が高く扱いづらい上に，硝酸を追加した際に激しく反応し飛沫のためコンタミネーションを生じやすい。本研究からは組織の完全な溶解に硫酸は必ずしも必要ないと考えられた。組織を溶解するための加熱時間については，温度にも依存するが，検鏡を容易にするために30分以上は必要であることが本研究によって示された。ただし90分は超えないようにし、それでも不十分な場合は強制的に終了すべきであると考えられた。検出感度を上げるため，組織の検体量を増やす方法もとられている。しかし多量の臓器（50-100 g）を溶解するには，強い火力で長時間の加熱が必要で，その条件では珪藻自体も溶けてしまう。また短い時間で加熱を終了すると，未消化残渣が多く鏡検に支障を来す。本研究で肝臓は10 gの組織が適切で，20 gが限度であると考えられた。また肺については，珪藻の数が顕著に多いため，1 gや2 gの検体量で充分であることが示された。強酸による組織の溶解が不十分であると，遠心分離によって珪藻が沈みにくくなることが示された。そのため小さな珪藻や比重の低い珪藻にとって（特に海水珪藻），組織の完全な溶解は重要であると考えられた。またフラスコの再利用による偽陽性検出に関して，走査型電子顕微鏡を用いた観察によって重要な知見も得られた。

在溺水的尸检诊断中，如果可以在肺、血液、肾脏或肝脏中检测到水中的微生物，例如硅藻，则患者死前吸入水的可能性很高。因此，以硅藻为指标的浮游生物（硅藻）检测被定位为提示因溺水而吸入的重要检测。但测试方法尚未完全建立，仍存在有待完善的问题。因此，在本研究中，我们致力于进一步改进检测方法，以优化硅藻检测的检测灵敏度和特异性。硫酸长期以来与硝酸和过氧化氢一起用于溶解组织。但由于其粘度高、比重高，处理困难，且添加硝酸时反应剧烈，容易因液滴造成污染。这项研究表明硫酸对于完全溶解组织不一定是必需的。尽管溶解组织的加热时间取决于温度，但本研究表明，为了便于显微镜观察，需要 30 分钟或更长时间。但有人认为，持续时间不应超过90分钟，如果还不够，就应该强制结束。为了提高检测灵敏度，正在使用增加组织样本量的方法。然而，为了溶解大量的器官（50-100克），需要用强热长时间加热硅藻，而在这样的条件下，硅藻本身就会融化。而且，如果短时间内完成加热，还会有大量未消化的残渣，对显微镜检查造成干扰。本研究中肝组织以10 g为宜，20 g为上限。对于肺，硅藻的数量非常多，因此表明1g或2g的样品量就足够了。已经表明，如果强酸不能充分溶解组织，则硅藻在离心过程中会变得难以下沉。因此，组织的完全溶解对于小型硅藻和低比重硅藻（特别是咸水硅藻）被认为很重要。此外，通过使用扫描电子显微镜观察，获得了关于因重复使用烧瓶而导致的假阳性检测的重要发现。