複数因子の同時阻害による新規治療標的探索法の開発

通过同时抑制多种因素开发新的治疗靶点搜索方法

• 批准号: 21H02796
• 负责人: 荻原 秀明
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: National Cancer Center Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02796/
• 关键词: 合成致死性; パラログ; がんゲノム医療; 個別化医療; エピジェネティクス; 標的探索; がん治療; 分子標的薬; 阻害薬; クロマチン制御因子; 個別化がん治療法; 個別化がん医療

本研究では、クロマチン制御因子のパラログ因子群の同時抑制による治療標的探索法を確立し、クロマチン制御因子欠損がんに選択的に致死性を示す治療標的を同定することを目的としている。2021年度は、クロマチン制御遺伝子のパラログペアを同時に抑制するsiRNAライブラリーを構築し、いくつかの合成致死標的となるパラログペの候補を抽出した。2022年度は、それらの中でSMARCB1欠損型細胞株モデルでの検討を行った。SMARCB1欠損型細胞株（ーSMARCB1細胞株）において、SMARCB1のcDNAを導入したレスキュー細胞株（+SMARCB1細胞株）を構築した。すなわち、これらの細胞株は、同じ細胞株バックグラウンドにおいて、SMARCB1があるか（+SMARCB1細胞株）、ないか（ーSMARCB1細胞株）の違いのみであるアイソジェニック細胞株モデルである。このSAMRCB1のアイソジェニック細胞株モデルを用いて、パラログペアsiRNAライブラリーによって、パラログペアを同時抑制したときに＋SMARCB1細胞株では生存し、－SMARCB1細胞株では致死性を示す、すなわち合成致死性を示すパラログペアを探索した。その結果、7ペアのパラログペアを抽出した。その中で1ペアは既存の標的候補であったため、スクリーニング自体の信頼性も担保されていると考えられた。そこで、残りの6ペアについて、別のバックグラウンドのSMARCB1正常型細胞株とSMARCB1欠損型細胞株で再検証を行った結果、1ペアのパラログペアX1/X2を絞り込んだ。さらにX1/X2の合成致死標的パラログペアの有望性を検証するために、SMARCB1正常型6細胞株とSMARCB1欠損型細胞株6細胞株の細胞株モデルで再検証した結果、SMARCB1欠損型細胞株群で選択的に致死性、すなわち合成致死性を示すことを明らかにした。

本研究的目的是建立一种通过同时抑制染色质调节因子的旁系同源物来寻找治疗靶点的方法，并确定对染色质调节因子缺陷的癌症选择性致死的治疗靶点。 2021年，我们构建了一个siRNA文库，可同时抑制染色质调节基因的旁系同源物对，并提取了几个可作为合成致死靶点的候选旁系同源物。 2022 年，我们使用 SMARCB1 缺陷细胞系模型进行了一项研究。从SMARCB1缺陷细胞系(-SMARCB1细胞系)构建导入了SMARCB1 cDNA的拯救细胞系(+SMARCB1细胞系)。也就是说，这些细胞系是相同细胞系背景下的同基因细胞系模型，唯一的区别是是否存在SMARCB1（+SMARCB1细胞系）或不存在（-SMARCB1细胞系）。使用该SAMRCB1同基因细胞系模型，我们创建了一个旁系同源对siRNA文库，该文库在+SMARCB1细胞系中存活，并且当旁系同源对被共抑制时在-SMARCB1细胞系中致命，即，它表现出合成致死性I。探索过。结果，我们提取了 7 个旁系同源对。其中一对是现有的目标候选者，因此筛选本身的可靠性被认为是有保证的。因此，我们使用来自不同背景的 SMARCB1 正常细胞系和 SMARCB1 缺陷细胞系重新检查了其余 6 对，结果，我们将旁系同源对 X1/X2 缩小为一对。此外，为了验证合成致死目标旁系同源对的前景，已揭示该病毒表现出选择性致死性，即合成致死性。