海外伝染病レッドマウス病をモデルとした魚類の獲得免疫応答の解明

以外来传染病红鼠病为模型阐明鱼类的获得性免疫反应

基本信息

批准号：
20KK0144
负责人：
瀧澤文雄
金额：
$ 12.06万
依托单位：
Fukui Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-10-27 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20KK0144/
关键词：
T細胞 B細胞獲得免疫魚類ニジマス IgM IgT 免疫記憶レッドマウス病魚病

项目摘要

ワクチン投与後の感染防御では、獲得免疫で働くB細胞およびT細胞の2種類のリンパ球が抗原特異的免疫応答を担う。また、これらリンパ球の一部が活性化し、免疫記憶細胞として体内に生存することにより免疫記憶が成立し、特定の病原体の再感染を防いでいる。また、T細胞にはサブセットであるヘルパーT細胞とキラーT細胞が存在し、これまでにそれぞれのマーカーであるCD4とCD8を用いてT細胞サブセットの識別・分離が可能にしてきた。当該年度は、魚類の粘膜面に感染する病原体やワクチン投与を模したモデル抗原を利用してIgM陽性B細胞とCD4陽性ヘルパーT細胞の免疫応答を調べたところ、脾臓において、IgM陽性B細胞と抗体産生を補助すると考えられるCD4陽性T細胞の活発な増殖が認められた。両細胞は互いに密接しながらも、IgM陽性B細胞が豊富なゾーン、CD4陽性T細胞が豊富なゾーンを形成しつつ、クラスターを形成していた。また抗原に特異的に結合するIgM陽性B細胞の集積が認められた。また、ゼブラフィッシュを用いて液性免疫を評価するためゼブラフィッシュIgMに対する抗体を作製した。作製した抗体はIgM重鎖の組換えタンパク質を特異的に認識したことからゼブラフィッシュIgMを検出可能であることが示された。これら抗体を用いて血漿中のIgMをウエスタンブロット法で解析したところ、野生型では多量体のIgMが検出されたが、RAG1欠損個体ではIgMが検出されなかった。抗原投与個体の血漿では抗原に対する有意な抗体価の上昇が確認された。以上より、本研究で作製したゼブラフィッシュIgMに対する抗体を用いて、ゼブラフィッシュのB細胞の解析や抗体価の評価が可能となった。

为了防止疫苗接种后感染，两种类型的淋巴细胞（B 细胞和 T 细胞）在获得性免疫中发挥作用，负责抗原特异性免疫反应。此外，其中一些淋巴细胞被激活并作为免疫记忆细胞在体内存活，从而建立免疫记忆并防止特定病原体的再次感染。此外，T 细胞有两个亚群：辅助性 T 细胞和杀伤性 T 细胞，并且可以使用它们各自的标记 CD4 和 CD8 来识别和分离 T 细胞亚群。在本财年，我们使用感染鱼粘膜表面的病原体和模拟疫苗接种的模型抗原，研究了 IgM 阳性 B 细胞和 CD4 阳性辅助 T 细胞的免疫反应，从而模拟了 CD4 阳性 T 细胞的活跃增殖。据观察，被认为支持抗体产生。尽管两个细胞彼此非常接近，但它们形成簇，形成富含 IgM 阳性 B 细胞的区域和富含 CD4 阳性 T 细胞的区域。此外，还观察到与抗原特异性结合的 IgM 阳性 B 细胞的积累。此外，我们还生成了针对斑马鱼 IgM 的抗体，以评估斑马鱼的体液免疫能力。制备的抗体特异性识别重组IgM重链蛋白，表明其能够检测斑马鱼IgM。当使用这些抗体通过蛋白质印迹分析血浆 IgM 时，在野生型中检测到多聚体 IgM，但在 RAG1 缺陷个体中未检测到 IgM。在施用抗原的个体的血浆中证实了针对抗原的抗体效价的显着增加。如上所述，可以使用本研究中产生的针对斑马鱼IgM的抗体来分析斑马鱼B细胞并评估抗体效价。